合理选择HPLC稀释剂有多重要?
文/ Aaron Gilljohann
应用高效液相色谱检测时，流动相的选择十分重要，因此稀释剂的选择就成为重中之重。根据高效液相色谱检测的不同要求，可以选择不同的类型的稀释剂。而选择时的LC-MS级这一指标到底有何意义？本文对此予以了详尽的解答。
众所周知，在高效液相色谱检测中要使用高纯度稀释剂作为流动相，在此有不同纯度指标的稀释剂可供选用，例如HPLC级稀释剂、梯度级稀释剂以及LC-MS级稀释剂。在色谱分析中，应用不同稀释剂的质量和稀释剂的纯度之间有什么关系？稀释剂的质量为何要与检测任务保持匹配？
稀释剂的质量表示的是：它们是由同一种原料生产的，理论上只有微量杂质（根据不同的产品：99.8%~99.9%）。但这微量的杂质却会在色谱分析中因不同的检测方法由被测样本而带来变化，此时的纯稀释剂已经不是原来意义上的“纯稀释剂”了。下面，我们将举例说明稀释剂质量的三个等级，以及使用合适质量稀释剂的意义。
图1. 使用何种质量的稀释剂应由用户自己确定，选择合适的稀释剂可明显降低色谱分析的成本。
HPLC级纯度
HPLC纯度主要是从利用紫外线探测仪或荧光探测仪进行等度分离来描绘的稀释剂质量。这种纯度的稀释剂以高纯度、高穿透性、低荧光以及低挥发残留物和低酸碱性而著称。
这种稀释剂能承受特殊的清洁过滤处理，以便尽可能除去干扰物质。这样一来，由杂质引起的干扰和影响也都降低到了最低，还能够降低色谱分离的背景噪音。在完成过滤后，它们将按照紫外线探测和荧光探测的方法在高效液相光谱仪中进行测试。
经质量监控可以保证：用户可以得到始终如一的稀释剂质量，以确保高效液相光谱分析的高重复性。
梯度级纯度
在高效液相色谱分离中，杂质的色谱法分离除了等度分离外还常常采用梯度清洗方法。在梯度清洗过程中液相的组成成分也在发生变化，例如在反相色谱中有机物含量增加。这对于不适合按照梯度分离法配制的稀释剂来讲会明显提高紫外线探测时的基线、对检测方法的灵敏性的影响。为了能够最佳利用Gradient纯度的稀释剂进行色谱分析，就必须对Gradient纯度的稀释剂进一步清洁。除了有利用紫外线和荧光进行探测的性能之外，还要对其梯度分离特性进行核查，从而保证Gradient纯度的稀释剂在一个批次的检验中质量稳定。
LC-MS级纯度
随着实验室引进了超高效液相色谱质谱联用系统，由于其具有较高的灵敏度，也对稀释剂提出了一些新的要求。因此，在质谱分析中应用的焦点，主要是针对低离子背景和高离子化效率。这样，稀释剂就要进行相应的净化处理，而最为关键的就是要清除微量元素、有机物质成分和（金属）离子。因为它们能够带来很高的背景噪音，还会在内收过程中将被分析物质收进来，从而明显降低检测的灵敏度。在质量监控时，将对利血平（m/z 609.49）的测试作为稀释剂质量监控的标准。
在测试过的质量范围内只有很小的背景噪音，没有因杂质带来的干扰信号。由于LC-MS纯度的稀释剂有很高的纯净度，因此也非常适合在超高效液相色谱分析中使用。由于其能保证超高效液相分析柱有较长的使用寿命，因此也对其在紫外和荧光探测中的适应性进行核查。
高效液相色谱分析技术中的纯度
除了HPLC级、梯度级和LC-MS级纯度之外，有些生产厂家还使用了介于梯度级和LC-MS级之间的稀释剂纯度，使用低纯度稀释剂虽然可行但却容易带来一定的风险。由于从生产厂方没有指定高纯度质量监控的方法，色谱分析结果的正确性和重复精度都无法得到保障，每一新批次的色谱分析都会因高背景噪音或者干扰峰而得到令人吃惊的结果。
小结
不同质量的稀释剂都有其存在的理由，实验人员进行分析工作时应根据需求选取适当的稀释剂是，只有这样，才能确保独立批次的色谱分析得到准确、可重复的检测结果。
（本文版权归实验与分析所有 摘自《实验与分析》2014-5期 P64）
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