液相色谱的头号公敌(Part 2)——除你武器!
上一期说到,气泡的三个来源。那这一期,我们来探讨一个非常重要的问题:气泡怎么就变成液相色谱届广大民群众的公敌了呢?
首先,我们就要说到泵(Pump)了。液相色谱泵的功能,是个将流动相以稳定的流速通过色谱柱,对想要分析的化合物进行洗脱。请注意,一定是稳定的流速,跟我拼读,wu~en~~吻,de~ing~~腚,wen~ding~~....所以,对于泵来说,稳定压倒一切。但是,如果流动相在系统里面的混合和运动过程中,有气泡出来了,问题也就出来了。假设泵本来应该输出1ml/min的流动相,里面出现一点气泡,体积就变了,而且气泡的可压缩性很强,体积还容易忽大忽小,流速就不准确、也不稳定了。
另外一个气泡产生危害的地方,就是检测器(Detector)。检测器位于色谱柱出口,流动相从色谱柱末端出来,会有一个压力的骤降,如果之前液体的压力有100bar,那么到了流通池内,压力只有10bar左右了。
我们回忆一下上期的中,突然把可乐瓶盖打开的情景。压力的骤降会让流动相对气体的溶解度大幅降低,从而导致气泡析出。大家想象一下在流通池内涌动的气泡,这样检测器的基线能稳定吗?
再来一张,“就这个feel~~”!
还有一个气泡可能产生的危害,就是对样品(Sample)的可能的影响。
流动相里面溶解的气体,跟可乐里面溶解的气体是不一样的,可乐里面溶解的是二氧化碳(Carbon dioxide),但是流动相里面溶解的是空气,主要就是氮气和氧气。一般来说,氮气还好,比较稳定,但是氧气(Oxygen)就比较活泼了。
大家听过这么一首歌么?
(背景音乐响起,女声)
“......人活著赖著一口氧气
氧气是你 ~~~~~~
如果你爱我~~~
你会来找我.....”
“No? Never Mind~~”Anyway,我的意思就是:
爱人,特别是可爱的女生,经常会被比喻成氧气。一方面表达"你如同新鲜氧气一样令我倍感清新,让我着迷"的谄媚,另一方面表达“离开你,我就无法呼吸”的不能自拔的下贱。
所以,你要是液相里面的样品,碰到如同可爱女生般清新迷人的氧气,你还坐得住吗?你还受的了吗?太容易跟她产生化学反应了!
所以,好理解了吧。氧气可能跟某些样品产生反应,造成样品的降解(Sample Degradation).如果你想要分析的样品里面含有一些荧光基团,想要用荧光检测器来检测的话,流动相里溶解的氧气会跟样品的荧光基团反应,造成荧光淬灭(Fluorescence Quenching),造成检测器无法检测到该化合物了。
说了这么多,大家明白了吧?
造成泵流速不准、基线噪音和可能与样品产生反应,使得气泡成为液相色谱行业的头号公敌!
下一期,我们再来看看最后关键的问题,我们怎么办?
(来源: 色谱学堂)
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