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双guide RNA/cas9 All-in-one 2hitKO系统在基因编辑方面的7大优势

2017-02-09 免疫细胞研究bioworld

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双guide RNA/cas9 All-in-one 2 hit KO系统在基因组编辑方面的7大优势:

1. 能够特异敲除一段DNA 序列,跟单guide RNA造成基因移码突变有区别,在基因的不同isoform敲除方面具有独特的优势,单guide RNA完全不俱备这样的能力

2. 具有很高编辑效率,在基因敲除方面的效率高达90%,在基因敲入方面效率达到50%左右

3. 最明显的优势是后期的阳性克隆鉴定更为容易,容易通过PCR观察条带大小来评判敲除情况

4.同样胜任同时敲除2个基因

5.可操作性强,只需掌握简单的分子克隆和细胞转染技术

6.可以将Cas9的启动子换成细菌和真菌启动子,用于细菌和真菌的基因编辑工作

7.更为丰富的选择,PX458M带有GFP,可以通过流式分选筛选阳性细胞克隆,而PX459M带有Puro,可以通过嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆






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