大咖分享|专家大咖总结很实用的细胞培养秘诀，请收藏！
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细胞培养是生物技术最核心、最基础的环节。
但在细胞培养的过程中
一不小心就染菌、布满小泡
细胞成团、细胞间隙不干净
如何才能避免细胞培养失败？
此次，来自湖南省人民医院生物样本库的娄华英老师将给大家带来五大细胞培养秘诀！
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从事基础实验的老师和同学们都知道要养好一种细胞并不那么容易，任何一个小小的失误都可能对实验结果造成极大的干扰，在进行细胞实验过程中，我发现要做好实验，不仅要细心还要有耐心。
好的经验要分享，现在，将我细胞培养的经验感悟跟大家交流一下：
1.
无菌意识要强
无论是细胞培养前的准备工作还是培养途中的操作手法，都应细心细心再细心。比如对于玻璃器皿（细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等）清洗，要先用洗衣粉刷干净（注意死角），然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水冲洗3-5遍，除去残留酸液。
瓶子之类，冲洗过程要使劲摇晃。然后在双蒸水浸泡 24 h。晾干后打包，160℃ 干烤 2 h 待；对于试剂配置，细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水，并注意 pH 值的调节；对于无菌检验，主要采用过滤除菌：如胰酶、抗生素、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等；实验进行前，超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌，以 70 % 酒精擦拭无菌操作台面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作；离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及带着手套的手。
2.
动作手法要既轻柔又有力
比如，吹打细胞时动作太重会有一堆的气泡，动作太轻就吹不下来。刚开始的时候吹细胞比较痛苦，稍微一下就起泡，多次失败后得出经验就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。
3.
不同细胞，要区分对待
不同的细胞所适宜的环境不一样。包括培养基的不同和细胞生长空间密度的不同。比如巨噬细胞，生长速度迅速，贴壁的速度很快，所以传代时留少量细胞培养出来的细胞状态会更好，减少其扎堆老化。所以在养细胞的时候要注意摸索细胞适宜的生长空间密度。
4.
好细胞要及时保种，细胞要分批传代
及时保种，分批传代的好处是，即使细胞培养出了问题，还有另一批备用的。避免细胞污染，全军覆没。
5.
试剂要分装保存
包括营养液、胰酶、血清等。尤其是血清，如果一次无法用完一瓶，可将 40～50ml 分装于无菌酸处理瓶中，甚至置青霉素瓶保存，贮存于–20℃。一般厂商提供的血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤。
细胞培养是生物医学研究的基本功，这些是我在细胞培养方面的经验感悟，那么你的呢？欢迎一起分享交流！
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