【中药单体药理】河北中医大等团队揭示黄芪甲苷IV减轻大鼠脑缺血再灌注损伤via抑制钙敏感受体介导的细胞凋亡
【写在前面】：今天推荐的是河北中医药大学、承德医学院及济南艾迪康实验室团队近日online于International Journal of Molecular Medicine（IF3.098）的一篇文章，揭示黄芪甲苷IV通过抑制钙敏感受体介导的细胞凋亡减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。
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【期刊简介】
【题目及作者信息】
Astragaloside IV attenuates cerebral ischemia‑reperfusion injury in rats through the inhibition of calcium‑sensing receptor‑mediated apoptosis
【摘要部分】
缺血性脑卒中后阻塞血管的再灌注引起的脑缺血再灌注损伤（CIRI）可导致继发性脑损伤。在整个CIRI中，凋亡起着重要的作用（现状）。黄芪甲苷IV是一种潜在的神经保护剂，可通过抑制细胞凋亡来缓解CIRI。钙敏感受体（CaSR）是一种G蛋白偶联受体，其激活加剧了缺血再灌注损伤。本研究的目的是调查黄芪甲苷IV对CIRI的保护作用是否可能与CaSR的调节有关（目的）。使用大鼠大脑中动脉阻塞/再灌注（MCAO/R）模型和嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的氧和葡萄糖剥夺/再充氧（OGD/R）模型来研究CIRI诱导的神经元损伤。神经功能评分（NFS），2,3,5-三苯甲基氯化萘，苏木精和曙红染色用于确定大鼠的脑损伤。测量细胞活力以评估OGD/RPC12细胞的损伤。使用蛋白质印迹法检查与凋亡和CaSR相关的蛋白质的表达。CaSR拮抗剂NPS-2143和激动剂GdCl3用于进一步证实CaSR在细胞凋亡过程中的作用（方法）。结果表明，黄芪甲苷IV通过降低大鼠的NFS，减少脑梗塞体积和促进PC12细胞的活力以及抑制被CIRI诱导裂解的caspase-3和CaSR的表达来减轻CIRI（结果）。本研究发现，CaSR的激活可能与CIRI诱导的大鼠脑损伤有关，而黄芪甲苷IV可以通过抑制CaSR激活的细胞凋亡来减轻CIRI（结论）。
（主要看原文表达，有助于我们自行撰写SCI）
【前 言】（如何从中医药引入研究主题）
补阳还五汤等中药已广泛用于急性缺血性脑卒中的治疗。黄芪甲苷IV（C14H68O14）是补阳还五汤的主要成分，是中成药黄芪的主要活性化学成分和质量控制标志物，在《医林改错》一书中有记载—王清任在清代所写。大量研究表明，黄芪甲苷具有抗炎和抗凋亡的特性，参与血管重构和能量代谢的调节，并对CIRI具有神经保护作用。我们以前的研究表明，黄芪甲苷IV通过抑制神经元凋亡来减轻CIRI，并证实其通过调节自噬发挥其作用。另外，据报道，黄芪甲苷IV可通过抑制细胞内钙超载来减轻缺氧/复氧引起的心肌损伤。
【结果部分】
1.黄芪甲苷IV对MCAO/R大鼠模型的神经保护作用。
2.OGD/R造模后黄芪甲苷IV对PC12细胞的保护作用。
3.黄芪甲苷IV降低了裂解的caspase-3的蛋白表达水平。
4.黄芪甲苷IV降低了CaSR在体内和体外的蛋白表达。
5.黄芪甲苷IV抑制OGD/R诱导的PC12细胞钙超载。
6.黄芪甲苷IV降低OGD/R建模后PC12细胞中AIF的蛋白表达水平并增加Bcl-2 / Bax的比例。
7.图文摘要：黄芪甲苷IV抗CIRI的神经保护机制。
8.补充：高分化，低分化和未分化PC12细胞的形态。
【结论与讨论】
中药苷类具有广泛的药理活性。人参皂甙Rg1和橄榄苦苷等糖苷在中枢神经系统疾病的治疗中起着重要作用；但是，它们的血脑屏障通透性低。相比之下，黄芪甲苷IV（784.97 Da）的小分子量和CIRI后血脑屏障的破坏导致高通透性。前期细胞和动物模型的研究表明，黄芪甲苷IV对大脑具有良好的保护作用，这与本研究的结果一致。在本研究中，动物样本量很小，因为大量先前的实验已经证实了黄芪甲苷IV对CIRI的保护作用。为了确保遵守动物伦理要求，使用了小样本量来达到实验目的。将进行更大样本量的后续实验，以进一步研究黄芪甲苷IV对CIRI的神经保护机制，以及钙敏感受体在CIRI中的作用。
本研究中使用的PC12细胞系是一种由神经营养因子诱导的高度分化的PC12衍生神经元样细胞 (图 8)。在高度分化的情况下可以观察到不同的形态(图.8C)，分化差和未分化PC12细胞。PC12是一种稳定的细胞系，可直接培养和传代，已被广泛用于体外神经系统疾病的研究。因此，本研究采用高分化的PC12细胞来确定黄芪甲苷IV对OGD/R诱导的细胞凋亡的影响和机制。未来的研究应利用原代培养的大鼠神经元和MCAO/R大鼠脑标本，进一步研究黄芪甲苷IV对CIRI细胞凋亡的作用，并探索黄芪甲苷IV的其他潜在神经保护途径。
本研究的结果表明，可能通过下调CaSR的表达抑制凋亡而保护神经元。黄芪甲苷IV可减轻MCAO/R大鼠的脑损伤，提高OGD/R后PC12细胞的活力，降低CaSR的表达水平，抑制细胞凋亡。黄芪甲苷IV可通过抑制CIRI诱导的CaSR表达的增加而抑制细胞凋亡，从而发挥其神经保护作用。
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