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动物细胞转染背景二:
本实验采用带有绿色荧光蛋白极影的质粒,利用脂质体转染人的肿瘤细胞系。绿色荧光蛋白(GFP)来源于海洋生物水木,近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋白质之一。
随着对极影表达的调控,蛋白质在活细胞中自然状态下的变化等重要问题研究的深入,迫切需要一种操作方便、不用加外源底物就能在活细胞中检测的分子探针。GFP就能满足这些要求,,在分子生物学中有广泛的应用前景。
GFP cDNA从水母中分离得到,是在研究水木的发光机制是发现的。钙离子和腔肠素于水母发光蛋白结合后,水母发光蛋白发蓝色荧光,同时激发GFP,使其发绿色荧光。
GFP基因汗3个外显子,长2.6kb。GEP是由238个氨基酸所组成的单体蛋白,其性质十分稳定。
GFP在不加任何外源物质的情况下,经紫外光或蓝光激发后即可产生绿色荧光,且荧光性质稳定。
GFP基因与目的基因相连接,不影响目的基因的表达且能较好的标识出目的基因产物的位置。目前,GFP的应用已非常广泛。
注:
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