实验专栏丨当苏木精碰上伊红，会碰撞什么火花？
作为一条合格的实验汪都知道，苏木精和伊红是HE染色中不可缺少的染色剂，苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色。
当着两者碰撞时，成功则是一张质地上乘的HE切片，那么失败又会是如何？今天中洪君带大家来看看那些碰撞失败的案例吧！这都是血和泪的教训啊！
问题一：细胞核呈红、棕色改变
原因：主要有苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。
对策：首先，每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力，发现氧化过度应及时更换。其次，可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水、0.2%碳酸氢钠等，在苏木精染色后，给切片以足够的蓝化时间。
问题二：细胞核染色苍白暗淡
原因：此类问题即苏木精染色太淡，可能有3个影响因素，切片在苏木精染色液停留时间太短；苏木精染色液过度氧化，失去染色能力，不能再继续使用；分化步骤处理时间过长。如果是骨组织细胞核暗淡，则多数是由于脱钙过度造成。
对策：切片重新染色。如果组织在酸性固定液如Zenk2er、Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长，细胞核染色能力将减弱，须增加其在苏木精染色液的时间，或用一些方法增加组织的嗜碱性，以改善细胞核的着色。例如：建议上述组织切片最好使用Weigert铁苏木精染色液；如果组织是用Zenker液固定的，可将切片脱蜡后放在5%碳酸氢钠溶液3～4h,流水冲洗5min后染色；如果组织是用Bouin液固定的，可将切片脱蜡后放在5%碳酸锂1h,流水冲洗10min后染色。
问题三：苏木素染色过度，返蓝不充分
原因：主要有苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。
对策：首先，每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力，发现氧化过度应及时更换。其次，可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水、0.2%碳酸氢钠等，在苏木精染色后，给切片以足够的蓝化时间。
问题四：切片中出现蓝黑色沉淀物
原因：苏木精染色液中的金属膜,黏附在玻片上。
对策：每天染色前仔细过滤苏木精染色液,或建议使用半氧化苏木精染色液,如Gill苏木精染色液,可以避免过多的金属膜产生。
问题五：切片在脱蜡后出现大片白色斑点
原因：由于烤（烘）片温度太低，玻片在脱蜡前没有充分烤（烘）干；切片在二甲苯停留时间不足，或二甲苯使用过久，造成脱蜡不尽。
对策：如果玻片是由于没有烤（烘），先用无水乙醇处理去除玻片上的水分，然后重新用二甲苯脱去石蜡。如果烤（烘）干不足的现象比较严重，可能导致切片脱落，则无法补救。如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成，或使用的二甲苯过久，切片则需退回到二甲苯停留时间相对长些，或更换二甲苯，脱色、漂白、重新染色。
问题六：细胞核灰蓝
原因：可能的原因是由于组织处理温度过高、过热,在石蜡停留的时间过长；或者固定时间太短,接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。
对策：理论上来说,加热处理仅在组织浸蜡步骤才使用,组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理,完成浸蜡处理后的组织,可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中,冷却凝固,以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好,脱水最好能从低浓度的乙醇开始。
问题七：HE染色不规则或不均匀
HE染色不规则或不均匀，从小斑点到大面积区域，散布切片各处，细胞核染色质不够细致
原因：由于使用密闭式组织处理机故障，如密闭不严，导致组织浸蜡时含有水和（或）固定剂。
对策：如果使用开放式组织处理模式，在相对湿度较高的地方，用甲苯替代二甲苯。如果使用密闭式组织处理模式，经常仔细检查仪器设备的各项功能是否完好，一旦发现密闭垫圈老化，应及时更换。
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