LC/MS及HPLC法分析花生中黄曲霉毒素
黄曲霉毒素是主要由黄曲霉（aspergillusflavus）等霉菌产生的代谢产物，存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米等粮油产品，具有很强的致癌性，是对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。现已鉴定出的黄曲霉毒素大约有20种，其中最典型的有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 共计4种（图1）。日本厚生劳动省发布的黄曲霉毒素检测法，是使用免疫亲和色谱柱进行前处理后再采用LC/MS法以及荧光衍生-HPLC 法进行分析。中国2017年1月发布的最新国家标准GB 5009.22-2016 中新增了同位素稀释液相色谱-串联质谱法。也同样先用免疫亲和柱对样品进行前处理，然后再用LC/MS方法检测。 本报告将参照日本的方法，对花生样品的黄曲霉毒素检测进行介绍。
图1 黄曲霉毒素的结构式
花生样品的前处理方法如图2所示。经搅拌机粉碎、萃取、过滤后，采用结合了黄曲霉毒素特异性抗体的免疫亲和色谱柱净化样品，然后直接测定。分析柱使用TSKgel ODS-100V 5μm (2.0 mmI.D. × 100 mm，5 μm)，将乙酸铵水溶液、乙腈以及甲醇的混合溶剂作为流动相进行分离。检测法列出了选择性离子监测（SIM）以及选择性反应监测（SRM）的检测条件，此次采用 SIM 进行检测。将总黄曲霉毒素浓度添加至检测限量值的2倍（20 μg/kg）的花生作为样品，进行前处理后，通过LC/MS 法进行测定，色谱图如图3所示。
图2 花生样品的前处理
图3 花生样品的色谱图（LC/MS）
添加浓度：总黄曲霉毒素量为20 μg/kg（检测限量值的2倍）
花生样品的前处理方法如图4所示。样品的粉碎、萃取、过滤处理以及使用免疫亲和色谱柱净化都按图2进行相同处理。黄曲霉毒素有天然荧光，无须衍生化即可检测出荧光。为增强黄曲霉毒素B1和G1的荧光强度，使用TFA将其衍生为氢氧化物。此外，黄曲霉毒素 B2和G2未进行衍生化。分析柱使用 TSKgel ODS-100V 5μm (4.6mmI.D. × 250 mm，5 μm)，以水、乙腈以及甲 醇的混合溶剂作为流动相进行分离。将总黄曲霉毒素浓度添加至检测限量值的2倍（20 μg/kg）的花生作为样品，进行图4所示的前处理后，采用 HPLC 法进行测定，色谱图如图5所示。因为衍生为氢氧化物，黄曲霉毒素的洗脱顺序与图3中有所不同。
图 4 花生样品的前处理法
图 5 花生样品的色谱图（荧光衍生化-HPLC法）
添加浓度：总黄曲霉毒素量为20μg/kg（检测限量值的2倍）
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