液相色谱谱图出现这些问题怎么办?学会这些技能让你玩转液相色谱！请叫我雷锋！

液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。今天小编就来说说液相色谱中谱图问题的解决方法~

一、峰拖尾的问题

1、筛板阻塞

解决办法：a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷   

解决办法：填充色谱柱

3、干扰峰

解决办法： a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误

解决办法：调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

解决办法：a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱

二、峰前延可能的原因 

* 在大峰前，有小峰流出；

* 柱死体积；

* 样品溶剂不适当；

* 过滤片部分堵塞；

* 柱过载；

* 色谱柱损坏；

1、柱温低

解决办法：升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当

解决办法：使用流动相作为样品溶剂 

3、样品过载

解决办法：降低样品含量

三、峰分叉

1、保护柱或分析柱污染(柱中有死体积)

解决办法：取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，   可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相

解决办法：改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

四、峰变形

1、样品过载

解决办法：减少样品载量

五、早出的峰变形

1、样品溶剂选择不恰当

解决办法： a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂

六、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

1、柱外效应

解决办法：a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池

七、酸性或碱性化合物的峰拖尾

1、缓冲不合适

  a、使用浓度50-100mM的缓冲液  b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

2、额外的峰

3、样品中有其他组份

4、前一次进样的洗脱峰

解决办法： a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速

5、空位或鬼峰

解决办法：a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积

八、保留时间波动

1、温控不当

解决办法：a、调好柱温

2、流动相组分变化

解决办法：a、防止变化（蒸发、反应等）

3、色谱柱没有平衡

解决办法：a、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

九、保留时间不断变化

1、流速变化

解决办法：a、重新设定流速

2、泵中有气泡

解决办法：a、从泵中除去气泡

3、流动相选择不恰当

解决办法：a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相

十、基线漂移

1、柱温波动（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）

解决办法：控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

2、流动相不均匀（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）

解决办法：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体

解决办法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）

4、检测器出口阻塞（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）

解决办法：取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化

解决办法：更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时

解决办法：用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

解决办法：检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

解决办法：使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂，但检测器未调整。

解决办法：重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。

解决办法：将波长调整至最大吸收波长处

十一、基线噪音（规则的）

1、在流动相、检测器或泵中有空气

解决办法：流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。 

2、漏液

解决办法：见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。

3、流动相混合不完全

解决办法：用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）

解决办法：减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备

解决办法：断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

6、泵振动

解决办法：在系统中加入脉冲阻尼器

十二、柱压高

1.新柱压力高

以原厂报告上完全一样的条件下测试比较，若压力在报告压力值上下浮动200-300psi以内，可视为正常范围；若高于出厂报告压力值1倍或以上，有以下原因引起：

 99.9％原因：系统压力高，包括保护柱，泵，管路和接头等引起。

 解决方案：从系统上拿掉柱子，逐步检查具体哪个部件引起的；或者换不同的仪器平衡柱子，比较压力值，排除柱子本身的问题。注意：必须是平衡柱子达足够时间后的稳定压力值。如果您仍然不放心，可先寄回在我们公司实验室测试。

0.1％原因：柱子本身压力高，寄回供应方测试，如若核实，可提供相关更换等处理。

2.使用一段时间后的旧柱压力升高

HPLC系统原因仍然存在，排除系统原因后，几乎100％的原因是由于实验过程中杂质在柱中的累积。

解决方案：尽量完善操作条件，做完样品后要及时冲洗干净，如缓冲盐的流动相一定要用高比例的水溶液（如90％）冲洗完全后再用有机相保存。

十三、柱效低

1.新柱柱效低

以原厂报告的条件下测试同样的标样，Supelco，Kromasil以及Agilent等柱子以甲苯作为比较，CNW柱子以萘作为比较，Waters柱子以苊作为比较，根据仪器不同，如果250*4.6mm，5um柱效在2000左右的差异可以认为是符合出厂要求的；如果您的仪器测试结果相差太大，有以下原因：

99.9％原因：系统问题，包括接了保护柱，平衡时间不够等引起。

解决方案：取下保护柱（测试柱效时不能加保护柱），增加平衡时间，对于新柱，50mm长的柱子平衡时间在30min以上，150mm的柱子在45min以上，250mm长的柱子在75min以上。如果您不放心，可先寄回在我们公司实验室测试。

0.1％原因：柱子本身柱效低，寄回公司检测，如果核实，可提供相关更换处理。

2.使用一段时间后的旧柱柱效降低

排除系统原因，基本是测试的条件和样品导致，如测试条件的pH值在柱子耐受pH值范围以外，导致柱子内填料的溶解或键和相流失，此外，样品前处理不好也会使柱子很快损坏。

十四、峰前沿、拖尾等峰形不好

（1）柱效测试标样峰形差：基本原因都是平衡时间不够引起，建议您平衡时间需达到第一部分我们推荐的时间。此外，还有系统原因，可建议您换一台再测试或寄回测试。

（2）样品峰形差：如果柱效测试峰形很好，但是测试样品峰形差，排除平衡时间等问题后，基本是由于样品性质所引起，如一些碱性样品会有拖尾现象，但是降低流动相pH值会有改善。

十五、寿命短

根据不同系列的柱子或不同的测试条件，寿命长短各有不同。建议您选择性能稳定、质量有保证的品牌。

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