脂质体制备中的TFF（三）
化学疗法被广泛用于乳腺癌患者的治疗。但是，大多数抗癌药物不能区分癌细胞和正常细胞，导致严重的系统性毒性。此外，化疗过程中的获得性药物耐受会进一步降低治疗效果。而使用合适的治疗策略，如纳米药物载体，包括脂质体/免疫脂质体，可能可降低不必要的化疗副作用，克服获得性多药物耐受，进一步调高治疗效力。
脂质体是美国FDA批准的球状脂质双层药物递送载体，具有良好的生物相容性和生物可降解性，作为纳米级别的载体，其具有良好的通用性，可携带疏水性和亲水性药物，且经表面PEG修饰后，具有较长的血液循环时间，所以被广泛的研究和使用。
本文研究了使用脂质药物递送载体，结合贝伐单抗和化疗，治疗HER2/MDR双阳性乳腺癌细胞。抗肿瘤血管生成的胞外药物（贝伐单抗）借由长循环脂质体选择性递送至乳腺癌组织的间质空间。通常使用的蒽环类化疗药物，阿霉素（DOX），通过免疫脂质体形式选择性递送至乳腺癌细胞，提高效力，降低副作用。人表皮生长因子受体2（HER2）抗体作为靶向配体，通过配体-受体反应，促进免疫脂质体DOX的内化过程。
贝伐单抗脂质体及DOX免疫脂质体制备
脂质体由50%氢化大豆L-α-磷脂酰胆碱、45%胆固醇、3% DSPE-PEG2000和2% DSPE-PEG-马来酰亚胺组成，通过溶剂蒸发和薄膜形成法制备。
贝伐单抗用被动载入法载体脂质体。操作时，将脂质以合适的量溶解于氯仿，溶剂先氮气吹干，再冻干机内过夜冻干。之后，用含有贝伐单抗的缓冲液对脂质薄膜进行水化，悬液过200nm膜挤出11次。
DOX通过硫酸铵梯度，主动载入脂质体脂质双分子层，梯度通过使用MicroKros 中空纤维组件切向流过滤进行洗滤，以磷酸盐缓冲液置换脂质体外的硫酸铵而形成。DOX/脂质比为1:5。未包封的脂质体层析去除。DOX包封后，载有DOX的脂质体与抗HER-2抗体偶联。操作时，先用2-亚氨基噻吩对鼠单克隆抗人-HER2抗体进行硫醇化处理，然后抗体上引入的巯基与脂质体DSPE-PEG2000的马来酰亚胺基团偶联，形成免疫脂质体。未偶联的抗体层析去除。
贝伐单抗脂质体及DOX免疫脂质体组合治疗效力
实验制备的新型脂质体组合系统使用HER2阳性和多药物耐受乳腺癌细胞系（BT-474/MDR）进行体外测试，使用移植瘤小鼠肿瘤模型进行体内测试。
体外细胞培养实验显示，免疫脂质体递送可形成较高的DOX细胞核积聚，而由于P-gp的作用，游离的DOX大部分在细胞膜附近和细胞质内。结合贝伐单抗脂质体和DOX免疫脂质体，可获得最佳的肿瘤生长抑制和最低的毒性。
荧光显微镜显示的DOX在BT-474/多药物耐受细胞中的分布。
在60天的观察周期内，肿瘤尺寸稳定降低，说明通过靶向递送，DOX和贝伐单抗存在协同效应。实验结果清楚地显示，在组合性脂质体药物递送组中，肿瘤生长被显著延迟。这种新型的组合治疗方法对于HER2/MDR双阳性乳腺癌患者具有较高的治疗潜力。
参考文献：Y.Tang, F.Soroush,Z.Tong,et al., Targeted multidrug delivery system to overcome chemoresistance in brease cancer. International Journal of Nanomedicine, 2017:12 671-681.
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