GMP Car-T细胞生产
近年来，Car-T细胞治疗技术为多种疾病的治疗提供了希望，美国FDA已经批准了几款CAR-T细胞产品，这更刺激了研究人员对将CAR-T细胞在其它恶性肿瘤疾病治疗中应用的研究。这些研究最终会进入临床试验，以评估新的CAR-T细胞的安全性和疗效。FDA要求这些细胞产品必需在IND批准下生产，且需按cGMP要求生产。GMP法规提供了用于细胞生产系统的受控、可审计、可重复的条件，以获得安全、潜在有效的产品。理解GMP所涉及的内容以及相关成本，是确认CAR-T细胞生产是否符合预期的基本条件。参考原文介绍在在GMP条件下做Car-T细胞生产决策时需要考虑的一些问题，详细内容，请参考原文。
GMP法规 – 要求什么？
GMP法规实际上覆盖了不同产品的生产，包括食品、小分子药物等，在FDA指南“用于I期新药的cGMP”中，简明扼要地总结了早期临床生产所需的要求。
FDA针对I期试验性药物cGMP指南覆盖的主要领域（A.P.Gee,2018）。
已经拥有GMP设施的机构应该对这些法规已经相当熟悉了，但对于暂时未建立相关GMP设施的机构来说，可能需要考虑合规的成本以及构建并维护所需的空间，其中最核心的是预期产品生产产量，因为一个“繁忙”的工厂可以平衡盈亏，而一个产能过剩的工厂可能会造成相当大的资源浪费，因为即使在没有生产进行时也需要进行维护。
设施
当决定建造一个设施时，设计问题就成为了一个主要考量。第一个决策是使用“多向”还是“单向”的物料、废物、人员和产品流动。这就引入了潜在的产品污染和交叉污染的问题。多向流动可更有效的利用可用空间，而单向流动可降低污染风险，但需要大量的空间来创造分隔干净和污染区域的走廊。
不同法规对环境空气条件的要求也是重要的考量因素。在美国，允许在位于10,000级（ISO-7级）洁净室内的100级（ISO-5）生物安全柜（BSC）内生产细胞治疗产品。在欧盟，生物安全柜必需置于1000级（ISO-6级）洁净室内，其连接至一个10,000级相邻区域。
另一个方面是需要考虑使用的生产技术。目前的趋势是向生物反应器转变，使用封闭的（或功能性封闭）的生物反应器可降低对洁净室级别的要求，因为污染的风险降低了。此外，如有可能，通过使用适当的程序，还可在单个区域内布置多个生物反应器。但如果在一个大房间内生产多个产品，必需有书面的转换程序，以降低产品污染和交叉污染的风险。
此外，还需要考虑进行T细胞转染的场所。由于CAR治疗的多样性的增加，需要考虑是否允许在一个生物安全柜/孵化器/生产车间使用多种不同的载体？同样，主要考虑的问题是交叉污染，必需建立特定的设施和SOP，以防止其发生。
员工和培训
CAR-T细胞的制备除了出色的无菌技术外，不需要特殊的技术。所涉及的步骤与用于生产其它细胞治疗产品的步骤没有太大的差别，但需要用于细胞基因修饰的系统，这就带出了转染试剂来源的问题，以及其是内部制备还是外部来源的问题，需要考虑。
员工的培训必需全面，且有文件记录。重量的是，需明白遵守SOP的重要性，同时也能检测细胞培养过程中的出现的问题。
在GMP下生产CAR-T细胞
总体考量
当设计一个CAR-T细胞生产SOP时，建议特别关注开发一个封闭的或功能性封闭的生产程序，以降低产品污染的风险，这可通过使用细胞培养袋、无菌连接设备以及新的自动化及半自动化细胞培养系统来实现。
在美国，开始CAR生产前，需要向FDA递交IND申请，获批后才可开始临床试验。申请的一部分是化学、生产和控制（CMC）章节，提供关于生产实施、使用的材料、生产和检测程序以及产品管理的详细信息。为加快该部分内容的获批，可参考FDA指南“用于人体体细胞治疗研究性新药申请（IND）的化学、生产和控制（CMC）信息的内容和和审查”以及指南“用于人体基因治疗研究型新药申请（IND）的化学、生产和控制（CMC）信息的内容和审查”。
生产失败
CAR-T细胞生产失败率范围为2-14%，主要的困难是获得含有足够数量细胞的终产品，可能的挑战包括来料的分离细胞产品可能被粒细胞和/或单核细胞污染，且重度预治疗患者过少的来料T细胞。
出厂检测
在GMP下生产的产品出厂时需附有分析证书（CoA），其列明必需进行的检测、使用的分析方法、检测设施的标识、产品出厂必需获得的结果、以及实际达到的结果。CoA必需包含的检测包括产品的一致性、纯度、活性、效力、微生物检测、稳定性检测。尽管每个产品可能会有差别，但其是针对这些特性的标准检测。
商品化和成本
已获批的两个产品（诺华的Kymriah和Kite Pharma的Yescarta），其均在患者接受治疗的医疗机构通过细胞分离技术收集起始材料。新鲜（Yescarta）或冻存（Kymriah）细胞运输至公司的GMP施设，用于制备CAR-T细胞，然后运回治疗中心，进行回输治疗。一个问题是，商业来源是否可满足预期的产品需求。鉴于目标是在自动化、功能性封闭的设备中生产这些产品，这就要求每个患者有一套系统，设备的可用性可能会成为一个成本限制因素。
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参考原文：A.P.Gee, GMP CAR-T cell production. Best Practice & Research Clinical Haematology, 2018:1-9.