最新透析应用集锦（十五）
承接前几期内容，本期继续介绍几篇典型透析应用文章。
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来自西班牙格拉纳达大学等的科学家们在2018年第18期的《Journal of Inorganic Biochemistry》杂志上发表了题为“Copper redox chemistry of plant frataxins”的文章。文中，使用2-碘乙酰胺对共济蛋白进行标记，操作过程中，使用MWCO 8kD的Spectra/Por Float-A-Lyzer G2 即用型透析装置对标记后的混合液进行透析处理，以去除过量的碘乙酰胺。
摘要：植物共济蛋白（frataxin）的c-端氨基酸序列中存在的保守半胱氨酸残基使其与其它此类植物中的共济蛋白相区别，且可能是共济蛋白组装和功能的关键。我们研究报导在铜驱动的氧化作用下，拟南芥（AtFH）和玉米（ZmFH-1和ZmFH-2）共济蛋白组装形成二硫桥接二聚体以及在化学还原作用下转化为单体的能力。通过电喷雾电离质谱法、电泳、UV-Vis光谱以及荧光检测方法，监测了氧化还原组装-解聚过程。结果表明，植物共济蛋白AtFH、ZmFH-1和ZmFH-2可被Cu2+氧化，并呈现氧化还原半胱氨酸单体 – 胱氨酸二聚体之间的相互交换。有意思的是，每种蛋白质的相互转换趋势并不相同。通过酵母表型拯救实验，我们发现植物共济蛋白对于植物在铜过量条件下的存活非常重要，表明这些蛋白质可能参与了铜的代谢。
原文：M.Sanchez, O.Palacios, C.Buchensky, et al., Copper redox chemistry of plant frataxins. Journal of Inorganic Biochemistry, 2018, 180: 135–140.
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来自美国田纳西大学查塔努加分校的科学家们在2019年第85期的《Bioorganic Chemistry》杂志上发表了题为“Studies on lysozyme modifications induced by substituted p-benzoquinones”的文章。文中使用MWCO 3.5kD的10mL规格Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析装置对修饰或未修饰的溶菌酶进行透析处理，之后以荧光光谱法检测醌化合物对溶菌酶的修饰作用。
摘要：蛋白质错误折叠可加快蛋白质的破坏过程，使其易受一系列事件的影响，如去折叠、加合物形成、低聚或多聚体形成。蛋白质天然结构的丢失可能导致其生物学功能紊乱和/或细胞毒性，从而导致相关的疾病。已有多个因素被确定可引起蛋白质结构改变，但是醌-诱导的蛋白质修饰却很少受到关注，无论是淀粉样蛋白或非淀粉样蛋白。在本文中，我们报导使用包括各向异性测定的荧光光谱、UV-Vis光谱以及SDS-PAGE，研究了苯并醌类化合物（BQ）处理对溶菌酶的修饰作用。溶菌酶与替代的BQ反应，以检测对蛋白质修饰的替代作用。此外，我们在浓度-、pH-、温度-和时间-依赖性研究中，评估了1,4-苯并醌诱导的溶菌酶修饰。我们的研究显示，所有的BQ均可通过加合物的形成、低聚作用、多聚物聚合和/或纤维化，以一种复杂的方式，修饰溶菌酶。使用在磷酸盐缓冲水溶液中的循环伏安法，监测了所选BQ的电化学特性，发现醌还原电位与其对溶菌酶的反应性趋势密切相关。
原文：J.Kim, C.A.Thomas, J.M.Ewald, et al., Studies on lysozyme modifications induced by substituted p-benzoquinones. Bioorganic Chemistry, 2019, 85: 386–398.
3
来自丹麦奥胡斯大学等的科学家们在2019年的《Cancer Immunology, Immunotherapy》杂志上发表了题为“STAT3 inhibition specifically in human monocytes and macrophages by CD163-targeted corosolic acid-containing liposomes”文章。文中，使用MWCO 300kD的Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析装置对抗体修饰或未修饰的科罗索酸长循环脂质体进行透析处理。
摘要：肿瘤相关巨噬细胞（TAM）在肿瘤相关的免疫抑制中有重要作用，CD163pos TAM引起的肿瘤浸润与大多数人体肿瘤的预后不良有关。所以，将TAM从肿瘤支持（M2-样）表型重编为肿瘤杀伤（M1-样）表型的治疗策略引起了极大的兴趣。肿瘤微环境中转录因子STAT3的激活与预后不良有关，STAT3的激活促进了TAM的免疫抑制表型。所以，我们的目标是开发一种通过靶向在TAM上高表达的内吞性CD163清道夫受体的药物，用于在人TAM中特异性地抑制STAT3。这里，我们报导一种由包装于长循环脂质体（LCL）的科罗索酸（CA）组成的靶向CD163的STAT3抑制药物，其通过单克隆抗体CD163抗体（αCD163）修饰作用形成CD163靶向-CA-LCL-αCD163。结果显示，CA-LCL-αCD163可在CD163pos细胞内特异性地抑制STAT3的激活（通过磷酸化），而对CD163neg细胞的影响较小。此外，CA-LCL-αCD163可抑制IL-10的STAT3-调节性基因表达，并提高TNFα的表达，从而表现出对人巨噬细胞的药物促炎效应。通过在培养基中显著升高的促炎细胞因子（IFNγ、IL-2、TNFα、IL-2）水平，证实了这种在mRNA水平的M1-样重编作用。由于脂质体是新型抗癌药物的一种非常有吸引力的载体，且由于直接的TAM靶向可降低STAT3系统性抑制的副作用，目前的研究可鼓励在体内背景下CA-LCL-αCD163的进一步研究。
原文：M.N.Andersen, A.Etzerodt, J.H.Graversen, et al., STAT3 inhibition specifically in human monocytes and macrophages by CD163-targeted corosolic acid-containing liposomes. Cancer Immunology, Immunotherapy, https://doi.org/10.1007/s00262-019-02301-3.
4
来自葡萄牙阿尔图瓦大学等的科学家们在2018年第545期的《Journal of Pharmaceutics》杂志上发表了题为“Receptor-mediated PLGA nanoparticles for glioblastoma multiforme treatment”的文章。文中，使用MWCO 10kD的Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析装置进行替莫唑胺（TMZ）PLGA纳米颗粒的体外溶出性研究。
摘要：多形胶质母细胞瘤是最致命的一种脑肿瘤，现有的治疗方法只能延长患者存活期约1年，其一线治疗方式是基于烷基化剂替莫唑胺（TMZ）的化疗。与其它许多化疗药物一样，TMZ有诸多限制，如高毒性和低生物利用度。本文提出了使用聚乳酸-乙醇酸纳米颗粒递送TMZ的方法。用转铁蛋白受体的OX26型单克隆抗体修饰稳定的纳米颗粒，以靶向胶质母细胞瘤细胞，因为已知这些细胞会过表达此受体。在模拟的生理条件下研究了TMZ从纳米颗粒的溶出特性，并研究了靶向的细胞内化作用。使用两种胶质瘤细胞系-U215和U87-研究药物的体外细胞毒性，显示制备的纳米载体可增强TMZ的抗肿瘤活性。使用转铁蛋白受体单克隆抗体进行的功能化作用被证实在增强胶质母细胞瘤细胞中的内化过程中有促进作用。
原文：M.J.Ramalho, E.Sevin, F.Gosselet, et al., Receptor-mediated PLGA nanoparticles for glioblastoma multiforme treatment. International Journal of Pharmaceutics, 2018, 545: 84-92.
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来自丹麦哥本哈根大学的科学家们在2019年1月的《Pharm Res》杂志上发表了题为“Application of a Quality-By-Design Approach to Optimise Lipid – Polymer Hybrid Nanoparticles Loaded with a Splice-Correction Antisense Oligonucleotide: Maximising Loading and Intracellular Delivery”的文章。文中，使用MWCO 100kD的Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析装置对制备的稳定核酸脂质纳米颗粒（SNALP）悬液进行透析处理，以去除过量的EtOH和未包封的Luc-ASO。
摘要：背景：反义寡核苷酸（ASO）对于细胞RNA功能的特异性调节来说，是非常有前景的治疗方式。但ASO效率会受到低效的细胞内递送的影响。脂质-聚合物混合纳米颗粒（LPN）是细胞内ASO递送的一种非常有吸引力的媒介，因其具有良好的胶体稳定性以及缓释性特性。方法：本文研究了由阳离子脂质5（L5）和聚乳酸-乙醇酸组成的LPN对于可介导荧光素酶基因转录的ASO（Luc-ASO）的递送。具体的目的是：（i）增加对决定LPN中ASO荷载的因素的机制理解，同时（ii）通过质量源于设计的方法，优化LPN，并将其定制用于在含有异常荧光素酶基因的HeLa pLuc/705细胞中进行Luc-ASO递送。使用风险评估和实验设计方法，将关键的剂型变量与关键质量属性（CQA）相关联，进而划定最佳操作空间（OOS）。结果：基于质量靶向的产品特性，鉴定了一系列的CQA。L5含量和L5:Luc-ASO比例（w/w）确定作为关键制剂变量，并进行了系统性的优化。从OOS确定的优化后载Luc-ASO的LPN，相比对照的基于L5的脂质复合物、L5-修饰的稳定核酸脂质纳米颗粒或以二油基三甲胺丙烷修饰的LPN（传统阳离子脂质），显示出了良好耐受性，且在更低的剂量条件下，更高的载入率以及介导的剪切校正。总结：优化后的载Luc-ASO LPN是一种稳定的剂型，可介导Luc-ASO高效的细胞内递送。为LPN的进一步开发开辟了道路，其可作为广泛适用的技术平台，用于核酸载体的细胞内递送。
原文：K.Thanki, S.Papai, A.Lokras, et al., Application of a Quality-By-Design Approach to Optimise Lipid – Polymer Hybrid Nanoparticles Loaded with a Splice-Correction Antisense Oligonucleotide: Maximising Loading and Intracellular Delivery. Pharm Res, 2019, 36:37.
文章摘要为编者翻译，由于水平有限，如有不当之处，敬请谅解，详细内容，请参考原文。
Spectra/Por 系列实验室透析产品...
作为实验室透析产品的开创者和技术领导者，我们提供最多样的透析膜选择，以满足实验室研究者不断变化的需求。针对截留分子量、处理量、化学相容性、温度、pH值和溶液条件，我们已经开发出两种级别的透析膜，分别是Spectra/Por标准级膜和Spectra/Por生物技术级膜。这些膜也可按材质分类，即再生纤维素膜(RC)和纤维素酯膜(CE)。
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材料成本低
一次性膜和透析装置
透析膜产品类型
根据膜等级和种类，我们提供多种类型透析产品：透析膜管，即用透析装置(RDD)和平面透析装置。卷式包装的透析膜管是最传统的一类，有干化膜、预湿膜和预处理膜可供选择。
为了使用方便，透析膜也可以预先组装成不同类型的即用透析装置（RDD）：Float-A-Lyzer G2及micro Float-A-Lyzer、Tube-A-Lyzer和透析袋。