史上最全RNA送样建议，收藏这一篇就够了！

随着二代测序技术的发展，RNA-seq技术以其高通量、高灵敏度的特点广泛应用于基础研究、临床诊断、药物研发等多个领域。在RNA-seq技术的工作流程中，样本制备是其中的基础环节，而好的样本质量是实验成功的前提。

诺禾致源在基因测序领域深耕十年，在RNA-seq项目中积累了上百万个样本的处理经验，对RNA样本可能遇到的质量问题有深入分析和研究。其中约60%为RNA降解，30%为RNA总量不足。为帮助科研用户获得最佳质量的RNA样本，本文将从样本采集、保存、运输等方面教您如何有效改善您的样本状态。

01样本采集

1. 防止外源RNA酶导致的降解

外源RNA酶导致降解是样本制备过程中最常见的风险之一。在样本采集过程中，要确保实验试剂、器械、环境、实验人员等，无外源RNA酶污染。可将实验用品采用DEPC灭菌处理，或直接购买RNase-free的实验耗材；同时实验人员应遵循“操作快，加样准”的原则，避免一次操作时间过长，增加RNA降解风险。

2. 防止内源RNA酶导致的降解

某些富含RNA内源酶的部位（如脾脏、胸腺）本身就容易降解，建议在液氮条件下将组织碾碎，且匀浆时使用更多裂解液。

3. 分管保存避免样本污染和降解

取样前先明确一次提取的组织量（见表1），取样后按照一次提取的量分管保存，避免二次分管和并管造成的污染和降解。

表1 送样量建议

下滑查看表格

4. 选择高丰度组织部位提高RNA总量

不同组织部位的RNA丰度不同，需尽量选用高丰度的组织部位如肝脏、脾脏、心脏（见表2）。如需使用核酸不丰富的部位，可按照丰度表和送样建议表进行计算，酌情增加送样量。

表2 RNA丰度

下滑查看表格

02样本保存

选择最佳的保存方式降低样本降解的风险

保存方式也是影响样本质量的重要原因。组织类型不同，保存方式也不同（见表3），可根据您的样本类型选择最佳的保存方式和操作方法。 

点击文章底部阅读原文查看保存方式和操作方法等补充信息。

表3 RNA保存方式建议

下滑查看表格

注意事项：

1. 动植物组织样本离体后立即液氮冻存，然后-80℃保存，尽快寄送，如需长期保存则需选择液氮冻存。未经液氮速冻可能会导致RNA缓慢降解。避免反复冻融，组织发生反复冻融后提取成功率在5%以下。

2. 保存液需完全浸透样本，保存液量不足会造成RNA降解。

03样本运输

1. 选择螺纹冻存管降低污染风险

带有螺口的冻存管密封性更好，不建议离心管送样；不得已使用离心管时，需用封口膜封死，避免撒漏。

2. 保证干冰用量且覆盖充分

干冰用量充分防止运输过程中发生样本冻融，保证样本四周被干冰完全覆盖。

RNA样本质量涉及样本制备的多个环节，比如切割组织时未经灭菌处理的刀片，这些小细节稍不注意就可能导致样本制备失败。但是根据我们的经验证明，以上这些方式都能有效地提升样本质量，提高样本质检合格率，避免反复送样。希望这篇文章对您的项目有所帮助，诺禾致源秉承专业、创新、诚信、共赢的理念，致力于提供高质量、高稳定、高效的服务，竭诚为您的科研助力。

更多问题欢迎给我们留言或联系当地技术支持和客户经理。

NGS产品部    孙依然 | 文案

---

点击“阅读原文”查看保存方式和操作方法