【实验工具专栏】Western Blot结果处理五分钟就能搞定！
点击上面蓝字↑↑↑关注【解螺旋】
——日读一帖，解螺旋大V团队伴你科研路
作者：解螺旋.翠花
解螺旋出品，转载须经授权
废寝忘餐、呕心沥血、历尽艰辛，终于拿到一张漂亮的Western Blot图，这时却发现不知道如何计算灰度值，肿么办？Don’t worry!翠花今天就跟大家谈谈如何使用AlphaEaseFC 软件来处理Western Blot电泳图吧（下载软件请回复关键字：0614）。
首先，鼠标点击图标：
打开AlphaEaseFC 软件，然后在“File”中点击“open”，打开一张western blot的结果图，于是出现以下界面：
界面分为五个部分，横竖两个菜单条，三个窗口：图片、Tool Box和Contrast Adjustment。打开图片后，若需要裁剪图片的话点击“Edit”，选中“Edit Activition”，在图片中选取裁剪区域，鼠标点到白色正方形可以调整裁剪区域大小，再点击“Edit”，选中“Crop”,若想重新保存裁剪后的图片可以点击“File”，选中“Save modified”，若要覆盖原图片可以选“Save”。左边的菜条有一些快捷按钮：图片叠加、打开、保存、放大、缩小、饱和度调节等。
然后利用“Contrast Adjustant”中如灰度系数Gamma 、线性 Linear 、使色彩均化Equal 等选项来调整条带与背景的最适合的灰度。以下是裁剪和灰度调整后的western 图。
如果图片本身不够完美，比如有噪点或者轮廓模糊，不用怕，我们可以帮它“化个妆”，点击“Enhancement Tools”，点击“Filters”，再选中“sharpen”和“Filter”就可以去噪点和使条带锐化，条带瞬间变得美美哒。
接下来在“Tool Box”中选中“Analysis Tools”,选中“Spot Denso”,界面会弹出“Spot Denso Results”窗口，Spot Denso Results中IDV一栏所示是目标条带的灰度值，注意“Black is 255,while is 0”，若显示为“Black is 0,while is 255”时则要在Tool Box中选中“Invert”逆转过来。在这里的“Object”有三种方式供选择来圈住条带，
待所有的目的条带都被我们圈起来以后，点击“OUTPUT”，选择保存的地方，则可将灰度值导出，以TXT的格式保存起来。
还有一种圈条带的方法，是针对轮廓比较清晰，与背景的对比度强烈的条带而使用的一种较为智能的方法：在“AUTO DETECT”中选择“AUTO SPOT”，在western图中选中要圈住的条带区域，然后回到“Tool Box”中点击“Find spot”，弹出一个对话框以后，很快便自动寻找到目标条带，如下图为绿色线条圈住的条带，接着点击“get data”，获得IDV值，点击“OUTPUT”，选择保存的地方，则可将灰度值导出。
最后将Txt里的灰度值转移到EXCEL中，求得各组中目的条带与内参条带的灰度值比值，再以对照组为分母，实验组为分子，获得实验组与对照组的灰度值比。
简单来说，用AlphaeaseFc 计算Western Blot电泳图灰度值分三步走：调灰度美化图片———圈条带获IDV值———EXCEL计算灰度值比值。
自从学会了AlphaEaseFC，导师再也不用担心我的western结果图不会处理了！！
【实验工具专栏】为你带来最实用的实验预测、实验设计、结果分析处理等方案，从此轻松应对各项难题！
未来三期预告：
1.如何使用Primer 3 Plus 和Oligo Calc设计qPCR引物；
2.如何使用DNAMAN软件制作序列比对图；
3.BLAST使用方法；
解螺旋专栏项目，每周定期发布：
每周一：【CNS专栏】
每周二：【肿瘤专栏】
每周三：【组学专栏】
每周四：【SCI专栏】
每周五：【信号通路专栏】
每周六：【轻松一刻】
每周日：【实验工具专栏】
更多科研专栏陆续开通，你想看什么？！选择自己最感兴趣的专栏，信不信解螺旋很快就找人搞定给你呈现出来？！不信你选一个试试...
都没有？就在解螺旋公众号中回复你想看的专栏内容，解螺旋小编会很勤奋的去收集大家反馈的！
持续关注解螺旋，看专栏文章，精彩从未间断···
解螺旋线下培训正接受报名的课程
（一）Meta分析强化课程（杭州班）（6.27-6.28）
（二）线上培训：SCI插图制作技巧（可免费）
详细课程信息请点击本文左下角阅读原文查看