分享 | 一文掌握细胞增殖七大法
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作者：解螺旋.子非鱼 解螺旋原创
转载请注明来源：解螺旋，医生科研助手
在科研中，小伙伴们经常需要检测细胞增殖情况，比如敲掉某个与细胞生长有关的基因以后，细胞是挂了还是增加了？又比如，要验证一种抗肿瘤药物的药效，怎么知道细胞存活量？小伙伴们，不必问师兄师姐了，史上最全的细胞增殖的检测方法，就在这里：
简单粗暴，傻瓜式的检测方法！利用计数板或计数仪得出细胞的数目，然后对数目进行比较。
优点是简单，省钱！不需要特定的试剂和仪器，准确；缺点：不适合样品数量多的情况（数得头昏眼花上医院，老板可不会给你报销！）、不适合评估特定的亚群。
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DNA合成代谢过程，那之后的每一条新合成的DNA双链像被安装了GPS定位器一样，都能被液体闪烁计数器检测到，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DNA的代谢及细胞增殖情况。优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。缺点：需一定设备条件：液体闪烁计数器，这玩意不便宜，同时还存在放射性核素污染问题，真是伤钱包又伤身体。
5-溴脱氧尿嘧啶核苷Brdu是演艺圈大腕胸腺嘧啶的替身，替身代替大腕胸腺嘧啶出演危险的武打戏——合成DNA，为了引人注目还要穿上特别耀眼的衣服——专一性抗体，然后替身曝光在媒体的镁光灯（免疫荧光、流式细胞术检测）下，狗仔队拍到替身，替身知道纸包不住火，就道出自己替大腕演过的武打戏（合成DNA的量）。
EdU检测法：EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，又是另一个替身B代替大腕胸腺嘧啶出演武打戏的戏码（合成DNA）！就是EdU能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
HeLa cells were treated for 30 min with EdU
MTT这个名字太没个性啦，你到底是个啥？只是世人不懂我的深度，这是我的真身：
分子式C18H16N5SBr，人家还是有个中文名的，叫噻唑蓝，请叫我蓝姑娘 ~
在MTT检测中，细胞是死是活主要看线粒体内的脱氢酶有没活性，那怎么知道他有没活性？这时蓝姑娘就牺牲自己，为脱氢酶验明正身。如果线粒体内的脱氢酶有活性，他就能将黄色的蓝姑娘（MTT）分解成兰紫色的水不溶性的甲瓒，并沉积在细胞中，死细胞无此功能。然后二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数和细胞活力成正比。
CCK-8就是MTT的升级版， CCK-8细胞活性检测试剂中含有WST-8——一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以为线粒体内的脱氢酶验明正身，在脱氢酶作用下，还原生成橙黄色的甲瓒产物。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上，是一种良好的细胞标记物。简单介绍以下CFSE检测法原理：
故事版：
就是讲述细胞君“富不过三代”的故事，CFSE那点染料是细胞君白手起家赚来的第一桶金, 细胞君将第一桶金平均分给两个儿子，他们每人只拿到父亲的一半财富, 按照这个节奏发展，由儿子留给孙子的财富就更少了。因此只要知道他们获得的财富就可以知道他们是第几代人。
学术版：
CFSE进入细胞后，可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一。在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。
Ki-67染色，研究人员可以评估处于细胞周期所有活跃期的总增殖细胞的百分比。科研人员可以借此观察药物或未知化合物的刺激效应或抗增殖效应。可用免疫组织化学技术或流式细胞术检测。
适合才是最好的
怎样选择最适合自己的检测方法？萝卜青菜各有所爱？可以有，但重要的是根据你的细胞类型和研究方案做选择。比如说，如果你已经有了待测细胞(不论是在培养板还是在溶液中)，希望了解细胞增殖中的代谢活性变化，那可以使用四唑盐和比色法检测。相应的，如果你对DNA合成的改变更感兴趣，可以选择用BrdU标记，再通过比色法、化学发光或荧光检测进行分析。或者你研究的是单个细胞，也可以用BrdU标记来检测DNA合成，将其与荧光标记的相应抗体结合，然后通过流式细胞仪来进行流式分选。小鱼介绍的方案都是久经考验的可靠方法，选择最适合自己的检测方式，好结果自然水到渠成。
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