（文章篇）S3E10：哎呦嘿，这小丫头片子还有两幅面孔呢？！
大家好，昨天我们分享了一篇Cancer Cell，介绍的是lncRNA通过影响蛋白的磷酸化修饰发挥功能，今天我们分享另外一篇Cancer Cell，换个角度来看lncRNA的功能和分子机制。
A long noncoding RNA activated by TGF-β promotes the invasion-metastasis cascadein hepatocellular carcinoma. Cancer Cell. 2014 May 12;这篇文章是二军大的孙树汉教授在2014年发表的，孙教授是国内做lncRNA研究的大牛了。
先上机制图：
这篇文章的主角是lncRNA-ATB (lncRNA activated by TGF-β)，说的是：
lncRNA-ATB被TGF-b激活上调（上游）；
lncRNA-ATB通过与ZEB1/2 mRNA竞争结合microRNA200s的方式（ceRNA）上调ZEB1/2表达，影响细胞上皮间质转化（EMT），从而促进肿瘤侵袭；（下游1）
lncRNA-ATB通过与IL11 mRNA直接结合，以提高其稳定性的方式上调IL11表达，并促进IL11分泌，激活STAT3信号通路，从而促进肿瘤迁移定植；（下游2）
其中下游的两种调控方式我们以前都讲过，分别见：
聊基金系列•第三期: 竞争性内源RNA（敌之敌，即吾之友）
(策略篇)：反义lncRNA调控邻近基因的经典模式与例外
总的来说，这篇文章相对来说还是蛮亲民的，主要内容包括四部分：
1. lncRNA-ATB的发现与鉴定；
持续看我们文章的小伙伴应该知道这里要讲什么了，对，就是“八部天龙”,即对新发现的lncRNA需要做哪些工作，这里我们简单说明。
没有看到的小伙伴可以看这两篇：
（文章篇）S3E7：一文掌握lncRNA研究的套路和创新点
（文章篇）S3E9:lncRNA研究，做到什么程度才能发Cancer Cell?
这里补充说明一点: 作者先用TGF-β处理细胞，通过表型和marker蛋白检测确定细胞发生EMT后，再做的lncRNA芯片，因为要检测的是受TGF-β调控的lncRNA分子。
好了，花开并蒂，各表一枝，我们看lncRNA-ATB作用机制的两部分。
2. lncRNA-ATB通过miR-200s上调ZEB1和ZEB2表达；包括两部分：lncRNA-ATB与miR-200s结合，lncRNA-ATB上调ZEB1和ZEB2表达。
lncRNA-ATB与miR-200s结合
为了验证lncRNA-ATB与miR-200s的结合及调控，除了我们介绍过的RNA pulldown和RIP外，还用了MS2-IP的方法来筛选与lncRNA-ATB结合的microRNA，MS2-IP的实验原理如下，这个技术在下一部分还有用到。
lncRNA-ATB上调ZEB1和ZEB2表达
这一部分的关键点有三个：
lncRNA-ATB与ZEB1/2表达正相关，并且互相调控；
两者都与miR-200结合并受到miR-200抑制；
没有miR-200，lncRNA-ATB与ZEB1/2之间的调控关系丧失；
3. lncRNA-ATB稳定IL-11 mRNA，并激活IL-11/STAT3信号通路
实际上lncRNA通过稳定基因的mRNA，提高基因表达水平的方式是比较常见的，我们上次在介绍反义lncRNA调控邻近基因经典模式最后说：能够提高编码基因mRNA的稳定性从而上调基因表达的lncRNA不一定是编码基因的反义lncRNA，这里就是一个例子，虽然 lncRNA-ATB发挥了稳定IL-11 mRNA的功能，但其并不是IL-11 的反义lncRNA。
后面部分是 lncRNA-ATB的细胞、动物功能和临床部分，我们简单介绍，相信大家都可以看懂。
4. lncRNA-ATB促进肿瘤侵袭迁移定植。
好了，这篇文章讲到这里基本就结束了，我们来思考一下：
lncRNA-ATB下游的两个机制我们前面都有讲述，而且两个机制都不是非常非常新的思路，不过一旦组合，其能量还是蛮可观的。那我们在做研究的时候，是否也可以通过组合技来提高文章的档次呢? 我相信肯定是可以的，前提是能做出来。
关于 lncRNA-ATB被TGF-β上调的分子机制，是作者没有做呢？还是做了没有结果呢？还是文章中已经有提及了呢？大家可以想想，也可以回复给我们，一起讨论。
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