（策略篇）S4E19：外泌体，光环下的史诗级征程

前天我们聊了近几年来火热的免疫治疗、DC细胞以及外泌体（点我查看）。

最近nature，cell也有文章表明了外泌体在肿瘤生长转移过程的作用。而今天的这篇文章，对外泌体的作用提出了新的见解。

从研究意思上来讲，外泌体的研究跟很多基础科研一样，主要目的是实现临床转化。从研究方法上来说，外泌体源于细胞却不同于细胞，对它的研究可以参考于后者。

Tumor-derived exosomes elicit tumorsuppression in murine hepatocellular carcinoma models and human in vitro （hepatology，5/17/2016)

1、作者首先通过外泌体标志物及TEM电子显微镜分离并验证外泌体。观察到肿瘤源外泌体（TEXs）后，检测到TEXs中的两种已知抗原，及抗原分子伴侣。

接下实验发现，这种含有抗原及抗原分子伴侣的TEXs能被DCs细胞摄取。并且通过检测DCs细胞表面的分子标志物（理论如下**），确定了TEXs能激活DCs细胞。

*DC细胞成熟后能伸出树突状或伪足突起，能摄取并处理抗原，将抗原信息提呈给T淋巴细胞。

**DC细胞表面有丰富的骨髓DC细胞标志物CD11c、抗原提呈分子MHC I、 MHC II，共刺激因子CD80、CD86，粘附因子ICAM，通过流式细胞实验发现，其相关细胞数量显著增加，表面了TEXs能激活DCs。

2、DCs细胞成熟后，能将抗原提呈给T淋巴细胞。而且前期报道细胞裂解液能介导细胞溶解。作者想检测DCtex（DC细胞经TEXs处理）是否可以触发T细胞介导的细胞溶解。

结果发现DCtex明显提升细胞溶解率，并存在与TEX浓度正相关，其比传统方法DClys（细胞裂解液）诱导细胞溶解更具优势。

体内实验也确定了，相对于传统的DClys处理，DCtex能显著抑制肿瘤的生长速度。

继续验证DCtex是通过什么起作用的。

动物实验：DCtex处理小鼠血浆及肿瘤组织中T淋巴细胞，发现CD8+T淋巴细胞显著增加。

这表明，DCtex的功能主要是通过CTL（毒性T淋巴细胞）引发的。

DCtex处理小鼠的肿瘤组织中调节T细胞（Tregs 免疫抑制）也显著减少。暗示着DCtex处理后能改善异位HCC小鼠的肿瘤微环境。

这部分内容表明了TEXs可以改善肿瘤微环境，诱导DC细胞介导抗肿瘤免疫。

3、动物实验：DC-tex处理小鼠，肿瘤生长受到抑制，并能延长生存期。

并且，原发HCC模型小鼠血浆和肿瘤组织中的CD+8T细胞明显增多，CD+4T细胞减少。

并分析了小鼠血浆和肿瘤组织中的细胞因子，发现干扰素γ(IFN-，T细胞免疫应答功能参数)水平上升，并且免疫抑制剂白介素10（IL-10）、TGF-β显著降低。

这表明了DCtex处理后，提升了效应T细胞的数量，降低了调节T细胞的数量，这改变免疫抑制到免疫刺激的免疫环境。

4、在免疫缺陷裸鼠（T细胞缺失）中，DCtex作用不明显。

这意味着DCtex产生功能需要T细胞参与。

并通过测量IFN-γ、 IL-2水平来判断激活的T细胞功能。

这表明了T细胞对DCtex敏感。

并且效应T细胞与目标细胞的比值，也决定了DCtex能影响细胞溶解的效率。

这部分，说明了TEX能携带抗原，触发DC介导及T细胞依赖的细胞溶解。

5、前期报道肿瘤细胞裂解液能起到交叉保护，TEXs是否含有与亲本细胞类似的特征呢？

通过多个细胞系验证了，DCtex能促进细胞溶解。实验表明DCtex提供交叉保护，抑制异基因HCC细胞和其他主要组织相容性复合体（MHC，主要功能是绑定由病原体衍生的肽链，在细胞表面显示出病原体，以便于的识别并执行一系列免疫功能）相匹配的肿瘤细胞。

最后，作者验证了一下HepG2（人HCC细胞系）TEXs诱发肿瘤特异性细胞溶解（DCs源于健康人体）。发现，这种DCtex能促进肝癌细胞及胰腺癌细胞溶解，在肺癌中不起作用。这暗示着可能HCC和胰腺癌存在相同的抗原。

本文所做的内容主要就是动物实验和细胞实验。其最大的亮点就是突破常规使用细胞裂解液激发DC细胞介导免疫，作者验证了外泌体进行免疫识别作用。

全文链接：http://pan.baidu.com/s/1c2r0YdE  密码：74ed

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