BCA法及Bradford法蛋白浓度测定区别（周三、04-27）

蛋白定量最常用的两种方法BCA法、Bradford（考马斯亮蓝）法。

现将其原理与实验选择中略微差别简介如下

原理

BCA法原理：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，吸光强度与蛋白浓度成正比。测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

Bradford法原理：考马斯亮蓝在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。在一定的浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。蛋白质和考马斯亮蓝结合，在2-5min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1小时内保持稳定。

选择区别

BCA法：该方法可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。但该方法受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT)低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。

Bradford法：该方法样品中β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)的浓度可高达1M，二硫苏糖醇(DTT)的浓度可高达5mM。但该方法受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。

小邦提示，在抽提蛋白选择裂解液的同时，蛋白定量的方法也需适当的注意，这样才能得到更好更准的实验结果。