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IHC/ICC 常见问题分析（周一、05-23）
细胞之邦，互助你我。感谢大家的关注，我是小邦。上周我们介绍了WB过程中常见问题分析，今天我们介绍的是IHC/ICC中常见问题分析。
脱蜡不彻底：延长脱蜡时间，更换二甲苯。
固定步骤（使用福尔马林和多聚甲醛固定剂）修饰了抗体识别表位：抗原修复法暴露出抗原表位，缩短固定时间
蛋白位于细胞核内（核蛋白），抗体不能穿透核膜：在封闭液和抗体稀释液中加入通透剂
PBS缓冲液被细菌污染后破坏了靶蛋白的磷酸根：在抗体PBS储存液中加入0.01%叠氮化合物，或使用新鲜无菌的PBS
由于不当储存、稀释或反复冻融造成一抗/二抗试剂盒失效：做阳性对照确认一抗/二抗试剂盒的有效性
没有封闭非特异性结合或封闭不充分：延长封闭时间，并考虑改换封闭剂
一抗浓度过高：滴定法寻找到最佳抗体浓度，或在浓度较低抗体中延长孵育时间（最好是缓慢而准确地结合）
存在内源性过氧化物酶活性：用酶抑制剂如抑制碱性磷酸酶的盐酸左旋咪唑(2mM)，或抑制过氧化物酶的H2O2(0.3% v/v)。
固定过度（固定剂用福尔马林和多聚甲醛）导致抗体识别抗原位点被修饰：改变抗原修复方法，缩短与抗原修复液的孵育时间。
通透作用破坏膜并除去了膜蛋白：去除缓冲液中的通透剂
组织冲洗不彻底，有固定剂残留：所有步骤都要用PBS充分洗涤