Annexin V测凋亡的常见问题（1）

你在应用Annexin V染色测凋亡的时候，是否有遇到一些让你疑惑的问题？

例如：

为什么要把EDTA洗去？

为什么正常组细胞要分出200μl体积不染色？

AnnexinV-PI+象限究竟是什么细胞？

今天，和明天，我们将会对Annexin V测凋亡的一些常见的问题进行讲诉，喜欢的亲可以转发给你的朋友同学们！

1为什么要把EDTA洗去？

问＆答-------------------------------------------

Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，只有在钙离子存在的条件下，与PS高亲和力特异性结合。

2为什么正常组细胞要分出200μl体积不染色？

问＆答-------------------------------------------

对照组包括

 （1）阴性对照（正常细胞不染色）

 （2）Annexin V 单阳性细胞（正常细胞经诱导凋亡后单染Annexin V）

 （3）PI单阳性细胞（正常细胞酒精固定后单染PI）

3AnnexinV-PI+象限究竟是什么细胞？

问＆答-------------------------------------------

对于悬浮细胞，多数都是细胞膜丢失得差不多了；而对于组织细胞或贴壁细胞，则多为消化、刮擦等所致的膜损伤。

AV-PI+细胞因过度消化，或高速离心，或大力吹打，而使膜受损。受损只是通透性增强，PS并没外翻，所以，小分子的PI进入，蛋白大分子的AV被挡在外面。

具体比例没有明确的规定，但是AV-PI+越多，人家对你的实验结果可行性就越怀疑。一般建议控制在10%以内。

4MTT法在酶标仪上检测时，有明显的药物浓度趋势，但用流式检测时，却看不到这样的趋势，这是什么原因呢？

问＆答-------------------------------------------

MTT法属于比较粗糙的活性测定方法，因此一些死细胞、碎片造成的OD值增高会造成假性趋势，应该以流式为准，只有两者一致，才能说明趋势。

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