购买的细胞出现死亡或细胞存活率不佳可能原因是什么？（10.30周五）

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大家好，我是小邦，今天给大家推送的是细胞之邦论坛微信公众号的第5期微论坛噢！微论坛里面会汇集7个问答，为您解答实验问题。由于上周巡回会议比较忙，没有及时编辑微问答，今天开始，微问答就会定时推送，记得随时关注我们的动态哦！喜欢的话，可以转发分享给您的小伙伴们噢！

贴心小提示：微论坛经过最近这两期的推送，有科研君反应问答的推送太过于个人化，不能达到大众化学习的目的，因此从第3期开始改版，将会针对细胞培养的大众化的，遇到的普遍的实验问题进行问答推送，喜欢的亲，可以转载到朋友圈，也可以自己收藏学习噢！

1购买的细胞出现死亡或细胞存活率不佳可能原因是什么？

问＆答-------------------------------------------

研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。胎牛血清使用错误或胎牛血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80℃太久。

2购买的细胞冷冻管经解冻后，为什么会发生细胞数目太少的情形？

问＆答-------------------------------------------

研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少， 大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤， 以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

3培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

问＆答-------------------------------------------

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

4什么培养基中可以省去加酚红？

问＆答-------------------------------------------

酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，(特别是雌激素)。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。

5L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？

问＆答-------------------------------------------

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

6GlutaGRO-I（corning 25-015-CI）是什么？培养细胞如何利用GlutaGRO-I？这个二肽有多稳定？

问＆答-------------------------------------------

GlutaGRO-I二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaGRO-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟， GlutaGRO-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。

7Hank’s 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank’s 平衡盐溶液(HBS)和Earle’s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？

问＆答-------------------------------------------

HBS和EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的pH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。

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