间质干细胞成脂和成骨诱导分化

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导读

成骨和成脂诱导是鉴定干细胞的一种重要的方法，也是最常用、报道见得最多的方法。成骨最常用的染色方法是茜素红染色（碱性磷酸酶），成脂诱导最常用是Oil Red O （油红O）染色法。下面介绍一下这两种染色方法的原理和步骤。

成骨诱导分化

茜素红染色方法和原理：茜素红又名茜素磺酸钠，茜素S，茜素红S，茜素胭脂红，1,2-二羟基蒽醌-3-磺酸钠，1,2-二羟基蒽醌-3-磺酸钠盐。橙黄色或黄棕色粉末。易溶于水，微溶于乙醇，不溶于苯和氯仿。1%水溶液pH 为2.15，其水溶液呈浅黄褐色，加盐酸后变成黄色，加氢氧化钠后则变成蓝紫色。有刺激性。能与许多金属离子生成带色化合物，能与锆、钍、铝、钛及铍和钙的显色反应。染色的原理就是茜素红和钙发生显色反应，产生一种深红色的带色化合物，这样成骨诱导的细胞外面沉积的钙结节也就被染成了深红色。

成骨诱导的过程是使钙离子能够以钙盐的方式沉淀下来，这就是我们常说的“钙结节”。鉴定钙结节的染色方法常用“茜素红”。

步骤：

（1）吸去诱导液，再PBS 洗一到两次；

（2）加入10％中性甲醛，固定30min-60min；

（3）吸去固定液，加入0.1%的茜素红染色液，染色6-10min；

（4）用PBS 洗两次，去处残留的染色液；

（5）加入PBS，完成染色。

成脂诱导分化

Oil Red O（油红O）染色的方法和原理：Oil Red O（油红O）又名为1-［2,5-二甲基-4-(2,5-二甲基苯偶氮)苯偶氮］-2 萘酚，苏丹红5B，溶剂红27。红色粉末。是一种油溶性偶氮染料。易溶于苯，溶于乙醇(呈浅黄色红色)和丙酮。生物染色剂,淀粉凝胶电泳中作类脂和脂肪染色。显微技术中用作脂肪染色剂。作为脂肪细胞的染色剂的原理是使用Oil Red O 的油溶性，对其它的细胞结构着色性差。

成脂肪诱导的过程中，细胞在胞浆中不断有油滴的累积，并不断的增加变大，最后整个细胞的胞浆中都是油滴。Oil Red O染色的方法是对油滴的染色的一种方法。

步骤：

（1）吸去诱导液，再PBS 洗一到两次；

（2）加入10％中性甲醛，固定60min；

（3）吸去固定液，加入现配和过滤后的Oil Red O 染色液，染色60min；

（4）用PBS 洗2-5 次，去处残留的染色液和残渣；

（5）加入PBS，完成染色。

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