侵袭&迁移实验中常见问题解答（03.30，周三）
细胞之邦，互助你我。感谢各位的关注，我是小邦。今天的你，在哪呢？今天的我，依然在美丽的广州---安邦的”细胞房“等你动动小指关注我们。今天小邦为大家带来的是：细胞迁移/侵袭实验中检测常见问题与解答。喜欢的话，欢迎各位转载到自己的朋友群，分享是一种美德，也是联系的桥梁。
迁移/侵袭实验中细胞未能迁移至基底室
a) 选择的膜孔径偏小。确保选择合适孔径的膜，可以尝试更大孔径的膜。
b) ECM铺得太多。过多的ECM可能会堵住孔，尝试使用少量ECM或者其它种类的ECM。
c) 气泡聚集。小室下面的气泡会妨碍细胞迁移，导致局部无细胞迁移。可以先放入小室，再先加培养基，避免气泡产生。
d) 对细胞没有进行饥饿处理，以及需要设置上下室培养基的FBS浓度梯度。
e) 对细胞的刺激没有促迁移作用。确保采用适合该细胞迁移的刺激以及正确的浓度。设置阴性和阳性对照组。
f) 细胞传代次数太多。随着衰老和代数增加，细胞形态会发生一些变化。复苏代数靠前的细胞重新开始实验。
g) 实验所用的细胞系不正确。确保使用正确的细胞系以及正确的刺激浓度。设置阴性和阳性对照组
迁移/侵袭实验中，对照组和测试组之间没有差别
a) 细胞传代过多。复苏代数靠前的细胞，重新开始实验。
b) 移去培养基的顺序有误（基底室和上室）。使用合适的对照，检查添加/替换的顺序是否会影响实验结果。
c) 使用的膜孔径大小不合适，太大或太小都会导致细胞很容易迁过去或者很难迁移。
d) 小室膜的上层擦拭不充分。一些实验只需要观察基底面的细胞，但是两面的细胞会被染上色并检测到，所以要擦去上层
显微镜下观察不到细胞
膜的类型不适合显微镜观察。不是所有膜的材质或孔径大小都适合于显微镜观察。查看说明书以找到推荐合适的膜。悬挂式只有1uM是透明的；站立式只有PTFE膜透明
迁移/侵袭实验中，染色后的结果较难分辨是否为迁过去的细胞
a) 背景太脏。使用干净的试剂，操作过程中不要带入杂质，确保背景干净，不会干扰显微镜观察。
b) Millicell小室是多孔径滤膜，染色后显微镜下会看到很多被染上色的圆孔，这是膜的微孔，不是细胞，只有具有明显拉长、扩张等迁移状态的染色才是细胞；
c) 培养时间过短。如果很多细胞只染到核，没有拉伸的细胞形态，则提示迁移的时间可能不够，需要延长时间
细胞贴壁不好
a) 实验所用的细胞可能需要不同的培养基或者添加物。根据ATCC建议，再次确认细胞所需要的培养基成分和所需添加物。
b) 细胞可能需要ECM。种细胞前，铺一层合适的ECM。
c) 细胞可能需要另一种ECM。如果细胞贴壁需要ECM，确保使用 的ECM是最合适的，而且浓度正确。
d) 起始细胞密度不正确。尝试增大或者降低起始细胞密度
文章参考来源：corning的transwell及merck的millicell