药物转运实验中常见问题分析(周三,04-06)
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a) 细胞培养时间过长。需要缩短培养时间或者降低细胞起始铺板密度。
b) 细胞起始密度过高。降低细胞起始铺板密度,最好设置几个密度梯度,摸索最佳起始细胞量。
c) 细胞传代次数太多。随着衰老和代数增加,细胞形态会发生一些变化。有可能这次实验的细胞比之前的代数靠前或者靠后,造成实验结果不稳定。复苏代数靠前的细胞重新开始实验。
a) 更换培养基时不小心碰触细胞。补加或者移走培养基时需要小心,特别是在上室操作时,避免戳破膜。
b) 加入细胞和培养基的顺序有误。不要在刚种下的细胞上加培养基。采取先按照某一浓度混匀细胞再接种或者先加培养基再种细胞的方式。
c) 培养基高度内外不平。上室里面的培养基和基底室的应该保持相同高度。
a) 使用正确的电阻值测定方法,如电极垂直插入小室、细胞稳定20min左右至室温再测量等
b) 细胞生长不均匀,导致每次测电阻值随着位置不同而读值不同。铺细胞的时候保证密度均一
c) 细胞过度生长。细胞汇合之后,如果继续培养会破坏细胞正常形态,甚至产生死细胞飘在培养基中,造成电阻值不稳定。降低细胞的初始密度
d) 细胞单层受到破坏
文章参考来源:Merck的millicell
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