解决慢病毒生产的质控问题，无血清悬浮培养系统助力生物制剂进一步发展丨医麦猛爆料

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2021年6月23日/医麦客新闻 eMedClub News/--CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T-Cell）全称是嵌合抗原受体T细胞，是一种新型的精准肿瘤靶向免疫细胞治疗技术。该技术以慢病毒为载体，将识别肿瘤细胞表面抗原的抗体与激活T细胞所需的信号分子连接，对T细胞进行改性，达到增强T细胞对肿瘤特异性杀伤的目的。

重组慢病毒是CAR-T生产制备的起始生物材料，构成了CAR-T细胞的关键分子元件，其质量对细胞产品及其治疗效果具有直接的影响。慢病毒的关键质量属性中，既包含产量、活性指标，也包含安全性指标。如何避免引入外源病毒因子和工艺杂质，降低纯化和质控难度，提高生产规模及产量，在生产工艺设计时应予以充分考虑。

慢病毒载体的生产工艺可以分为上游、下游两个部分。

上游部分的主要目标是获得具有一定滴度的病毒上清。主要技术包括培养细胞和病毒包装，涉及细胞系的选择、细胞培养、质粒转染、表达包装病毒等技术内容。

下游部分的主要目标是从上游获得的病毒上清中去除杂质，提高其滴度与纯度，保证病毒载体的效率与安全性。其中涉及的技术包括澄清、Benzonase酶处理、超滤、层析、浓缩、无菌灌装等。不同的工艺组合，会影响最终产物的性质及其相关参数。

▲ 慢病毒载体生产工艺

慢病毒的上游生产中，通常以HEK293T为包装细胞，使用含血清的混合培养基，在培养瓶或细胞工厂中贴壁培养，通过质粒瞬时转染的方式进行病毒包装。该方法技术相对成熟，操作简单易行，为很多实验室采用。

然而，使用动物来源的血清，增加了外源病毒因子污染的风险；血清成分复杂，组分不明确，不符合药品生产注册的监管精神；血清引入的牛血清白蛋白，增加了纯化工艺和质量控制的难度；使用贴壁细胞包装慢病毒，工艺难以放大，产量难以提升，成本难以下降，且对劳动力消耗巨大；消化贴壁细胞使用动物来源的胰蛋白酶，可能引入外源病毒因子，增加质控难度等等。

湖南远泰生物技术有限公司贯彻质量源于设计（QbD）的研发理念，从工艺方案设计上就要求避免使用成分不明的培养基组分和动物来源的生产物料，并尽量采用适应悬浮培养的生产细胞，以期建立重组慢病毒工业化的悬浮培养技术体系。

无血清培养基成分明确，安全风险可控，减少了工艺杂质，质量控制相对简单；悬浮培养可以使用生物反应器，生产工艺易于放大，对人力耗费较低。通过无血清悬浮培养系统进行生产，是生物制品工艺发展的潮流和方向。

▲ 远泰生物慢病毒收获上清批产量（TU/L）

湖南远泰生物技术有限公司，通过逐步降低血清浓度，成功实现了对HEK293T细胞的无血清悬浮驯化培养。使用该悬浮系统进行生产，慢病毒产量从贴壁系统的1×10¹⁰TU/L提高到5×10¹⁰TU/L，而生产时间则减少了20%，有效提高了生产效率。作为一个专业的慢病毒生产平台，远泰生物已建有4000平方米GMP厂房并投入使用，拥有自主知识产权的慢病毒高产量的成熟悬浮细胞生产工艺，在病毒载体的构建、研发、生产、质量控制领域均有丰富的技术积累，已成功提供超300例IIT细胞治疗用临床级慢病毒载体。未来，远泰生物愿意为国内外生物企业提供力所能及的帮助。

▲ 湖南远泰生物技术临床级慢病毒质量标准

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