精彩回顾丨AAV载体的大规模生产工艺，全面助力A型血友病的基因治疗产品的开发

医麦客近期热门报道
★独家盘点：全球主流封闭式细胞治疗处理系统★首次License out交易！科济药业对外授权两款CAR-T产品韩国权益丨医麦猛爆料

2021年8月26日/医麦客新闻 eMedClub News/--本期医麦课堂携手宜明（北京）细胞生物科技有限公司，带来“AAV载体的大规模生产工艺，全面助力A型血友病的基因治疗产品的开发”线上专题讲座，助力中国医药产业人才成长。

在8月17日的公开课中，医麦课堂邀请到了宜明细胞董事长兼首席科学家 孙秀莲博士，孙博士带来了主题为“AAV基因治疗药物大规模生产工艺研究”的精彩分享；同时邀请到了ASC Therapeutics公司的创始人、CEO 姜儒鸿博士，姜博士带来了主题为“用于治疗A型血友病的以AAV为基础的基因治疗、基因编辑治疗产品的开发”的精彩分享。

孙秀莲博士的讲座内容主要包括：

☑ AAV生产的工艺控制、治疗标准；

☑ 降低病毒载体的生产稳定性和实现规模化生产；

☑ AAV载体悬浮无血清生产的工艺优势和案例分析。

姜儒鸿博士的讲座主要内容包括：

☑ 基因专有技术平台的管线开发思路

☑ 基于AAV的全球主要基因治疗A型血友病产品比较

☑ 治疗A型血友病的二代基因疗法及新型编辑疗法的介绍

长 按 扫 码

了解更多相关资料

公开课精彩回顾

近年来，随着基因治疗技术的飞速发展，以血友病为代表的罕见病治疗技术取得了不断突破，为血友病的治疗带来了曙光。同时很多新药研发企业也向国内CDE或美国FDA递交了新药申请，并且已有部分获批进入临床。

1960年AAV被美国的两位科学家在实验室发现，其后AAV作为基因治疗药物载体已经被应用了很长一段时间，但是一款基因治疗药物从临床前到临床，会经历很多挑战， AAV大规模生产工艺的开发优化就是挑战之一。

AAV结构简单，免疫反应非常小，可以感染人类以及其他灵长类动物，且不致病，是一个非常好的基因治疗工具。在基因治疗中，AAV平台化工艺决定着产品的质量和规模。宜明细胞使用安全有效的三质粒转染系统进行AAV包装生产，同时拥有独立驯化的具有自主知识产权的293XS悬浮细胞系，可线性放大到200-500L。

AAV基因治疗药物的研发生产工艺主要包含两个方面，分别是质粒生产研发和AAV生产研发两部分。宜明细胞在质粒研发生产过程中具有如下特点：

1. 发酵全过程无抗生素、无动物源成份；

2. 高发酵产量>1g/L，发酵规模可达200L；

3. 创新高效的两步柱层析纯化，填料国产化，大幅节省成本。

宜明细胞的AAV制备平台，采用无血清悬浮培养方式，包括上游的细胞培养、质粒转染以及裂解澄清等，下游的两步柱层析、无菌灌装和储存，整个过程应用一次性以及密闭设备。有如下工艺特点：

1. 成熟的无血清悬浮培养体系，拥有独立驯化的悬浮细胞293XS细胞库，细胞密度可达1E7 cells/ml；

2. 拥有成熟的多种血清型纯化平台，包括rAAV2/2、rAAV2/5、rAAV2/8、rAAV2/9；

3. 高产量，低空壳率<30%，在后期AAV的空壳识别中有三种方法，分别是AUC、HPLC和电镜，而AUC检测是业内公认的AAV空壳率检测最为准确地方法，宜明细胞设有AUC检测平台，可自主完成AAV空壳率的检测；

4. 可线性放大到200-500L。

AAV在生产制备的过程中虽然非常复杂，但是宜明细胞对病毒生产工艺的优化也在不断探索中，期待能够助力基因治疗药物研发，为病患提供治疗福音。更多详情，扫描下方二维码，进入课程回放。

扫描二维码，回看课程

近年来，在基因治疗领域中，血友病是一个非常大的市场，中国血友病的市场增长率接近40%，而美国的血友病市场是7%。但是在国内的血友病市场用药渗透率只有10%左右，所以血友病在国内是一个潜在性市场。

血友病是由于基因突变造成的，B型血友病占市场的15%，A型血友病占市场的85%，A型血友病的市场比B型血友病市场大得多。A型血友病是凝血VIII的基因突变，造成病人没有能力生产凝血VIII，出现出血的话，病人没有止血能力。所以很多企业尝试通过基因疗法来治疗血友病。

目前，AAV基因治疗的产品还在一个非常高的使用剂量上，主要为了保证它的持久性。第一代的疗法基本是提高AAV载体转染率，以及如何提高基因的表达，优化转录。第二代的产品，我们不但做到了前面两项，在表达分泌上也优化了，这样由于高剂量病毒造成的免疫抗原性就会降低。这样产品疗效的可持续性就提高了。这是第一代和第二代区别。在第二代基因治疗中，也就ASC公司研发的治疗产品ASC-618，使用特殊的改造修饰，提高了凝血VIII的表达量，同时还提高了分泌效率，所以在达到同样所需血液中凝血VIII浓度的情况下，ASC-618的AAV剂量低数十倍。

第二代基因治疗产品ASC-618提高了凝血VIII的分泌效率以及临床有效剂量，比目前常规性剂量降低了一个数量级，因此也降低了由病毒引起的免疫原性。由于剂量很低，对肝脏毒性也极大地降低了，在一定程度上提高了治疗的持久性。

第三代基因治疗是将基因编辑技术运用到了血友病，先进的基因组编辑平台——TARGATT, TARGATT-Alt和CRISPR技术以治疗疑难罕见病。，可治疗肝脏细胞处于活跃增长期的儿童与青少年患者（不会造成拷贝数随细胞分裂而丢失）有望治愈更多患者。更多详情，扫描下方二维码，进入课程回放。

扫描二维码，回看课程

回答环节

1

除了在报告中的空壳率检测方式，还有哪些表征方法？

孙秀莲博士：AAV空壳率是很重要的表征，其他的主要是滴度检测，也就是基因组滴度和物理滴度。
此外，空壳率在现在的常规中主要通过三种方法，AUC、HPLC以及电镜。AUC可以说是金标准，因为它是最严格、最精准的分析方法。HPLC比AUC要差一些，比如AUC检测出30%的空壳，HPLC检测的可能只有20%。电镜由于主观方面影响太多，毕竟是人数的，所以某种意义上来说是不太客观的。

2

血友病现在分成人和儿童，AAV载体在设计过程中，有什么样特殊考虑来针对两种不同人群？

姜儒鸿博士：在治疗儿童的AAV载体设计中，是通过插入一个基因编辑到染色体中，染色体插到患者的肝脏细胞中的基因组中，所它会跟随肝脏细胞分裂而分裂。在治疗成人的AAV载体设计中，是通过染色体之外的方法。

更多精彩问答，扫描下方二维码，进入课程回放！

扫描二维码，回看课程

  医麦课堂         

为助力中国生物医药产业人才成长，医麦客特隆重推出“医麦课堂”栏目，诚邀生物医药行业内资深权威的大咖专家，聚焦新药研发过程中的各类问题，为广大医药产业人才提供即时即看即学的精彩课程。目前已推出二十余期，在线浏览人次3.5W+，深受好评！

往期回顾

精彩回顾丨新冠变异愈演愈烈，病毒检测新方法和新策略
精彩回顾丨免疫细胞疗法公开课第四讲，CAR-NK细胞治疗产品研发流程解析

医麦客始终致力于生物创新药的前沿技术、行业动态、产业洞察等原创新闻报道，全媒体高端矩阵用户达16万+，其中工业用户占比超50%，科研与临床用户约为30%，投资机构用户超过5%。为促进产业细分领域的互动交流，我们组建了多个专业微信群，欢迎扫码加群。