开心果或成为预防与治疗单纯疱疹病毒的新手段？
何为HSV？
单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)是最早发现的人类疱疹病毒，在成人和新生儿中非常普遍。此病毒会在宿主体内持续存在并定期重新激活，特别是在某些特定条件，如宿主在身体器官非正常工作的压力状态及其出现免疫抑制的情况下。因此，如不进行及时治疗，其引发的中枢HSV感染相关疾病的死亡率可达到70% [1]。
目前有哪些用于治疗HSV感染的药物？
尽管HSV是无法治愈的，但已有伐昔洛韦(Valacyclovir，VCV)等核苷类似物广泛用于预防和治疗HSV的感染 [2]。核苷类似物被HSV编码的胸苷激酶(Thymidine Kinase，TK)单磷酸化，随后被宿主细胞激酶以三磷酸形式转化，该三磷酸形式对HSV编码的DNA聚合酶起到了脱氧鸟苷三磷酸竞争性抑制剂的作用，从而阻止病毒复制[3,4,5]。
开心果提取物可为新型抗HSV的潜在药物？
目前，由于超过40%的患者已出现过反复感染得状况，而现阶段的反复治疗导致毒株产生了耐药性 [6]。因此寻找新的抗病毒药物成为了许多研究人员的主要目标。
近年来，一些研究也证实了酚醛和类黄酮化合物的抗HSV活性，并且经过多种提取物的对比，发现仁和种子提取物显示出显著的抗病毒活性[7]，开心果中的多酚也具有杀菌活性，因此对于进一步研究开心果提取物的抗HSV作用是很有必要的。
近期，来自意大利的Maria Musarra-Pizzo教授等人对开心果仁中富含多酚的提取物和纯多酚化合物的体外抗HSV-1活性进行了研究，并将其研究成果发表在了Plants期刊上。该研究通过评价天然带壳开心果仁(Pistacia vera L.)的多酚富集提取物(NPRE)对1型单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的活性来评价其抵抗HSV病毒的活性。
研究对象
研究采用了美国天然带壳开心果仁，按照Maria等人报道的方法获得富含多酚的提取物(NPRE)。
研究过程
Maria教授等人将天然带壳开心果仁的多酚富集提取物，与感染了用于体外实验的HSV-1实验室菌株的非洲绿猴肾细胞系(Vero)的储备液一起孵育。并进行多酚测定，毒性测定，抗病毒作用测定以及NP MIX与NPRE的结合测定，研究开心果中的多酚对HSV-1的作用效果。
多酚测定
根据报道，已知NPRE中多酚总量为8.1 mg每100g鲜重的NPRE [8]。
细胞毒性测定
1)NPRE处理对细胞单层生长的影响：将Vero细胞系用不同浓度的NPRE处理24小时，观察细胞形态。
2)将NPRE稀释并添加到细胞培养基中，将Vero细胞与各浓度稀释液(0.4–1.4mg/mL)进行培养72小时，期间保持溶剂(Dimethyl sulfoxide，DMSO)低于1%以限制对细胞的毒性，每种稀释度下均设有DMSO对照，并通过ATP的产生测量细胞增殖和活力，计算50%的细胞毒性浓度(CC50)值为1.2 mg/mL。
抗病毒作用测定
1)噬菌斑减少测定：将稀释的病毒悬浮液加入到Vero细胞中，37 ℃培养1小时。用各种非细胞毒性浓度的NPRE或溶剂在0.8%甲基纤维素的培养基中稀释细胞，浓度为20um的阿洛昔韦做阳性对照，三天后使用结晶紫染色使噬菌斑可视化。
2)病毒蛋白表达分析：将Vero细胞未感染(模拟)或感染HSV-1，然后用非细胞毒性浓度的NPRE处理24小时，DMSO对照，裂解样品，通过SDS-PAGE分离总细胞蛋白，进行免疫印迹带强度的光密度分析。
3)病毒DNA定量：使用针对HSV-1特异性TagMan探针进行定量实时PCR分析。
使用NPRE和NPMIX的结合测定
采用结合抑制测试法对前面的测试结果进行验证。
研究结果综述
1)噬菌斑减少测定结果表明，NPRE表现出浓度依赖性的抗病毒作用。用0.8 mg/mL NPRE提取物处理可减少100%的噬菌斑。
2)病毒蛋白表达分析显示，NPRE减少了测试蛋白质的积累
3)病毒DNA定量实验表明NPRE处理可能会干扰DNA的合成过程，从而导致病毒DNA合成的减少。
4)NPRE和NPMIX的结合测定表明NPRE处理对初始附着步骤没有影响。
总结
此实验证实了从带壳开心果中提取的富含多酚的提取物对HSV-1具有显著的抗病毒作用。尤其是，作者也证明了NPRE表现出了浓度依赖性的抗病毒作用，并当使用最大非细胞毒性浓度(0.8 mg/mL)时，噬菌斑被完全减少。
小结
HSV一直困扰着很多人，在专门针对HSV的疫苗还未被研究出来的当下，耐药菌株的产生成为了新的健康问题。Maria教授等人的这项研究表明了开心果仁中的多酚对HSV是有一定效果的。在未来，开心果仁中的多酚或将成为单独的或与标准抗病毒疗法联合治疗HSV-1感染的新型局部或口服药物制剂的开发候选者，成为克服与耐药菌株有关问题的新策略。
原文出自Plants期刊文章
Maria, M.-P.; Rosamaria P.; Ichrak B.-A.; Antonella S.;Giuseppina M. and Maria T.S. In Vitro Anti-HSV-1 Activity of Polyphenol-Rich Extracts and Pure Polyphenol Compounds Derived from Pistachios Kernels (Pistacia vera L.). plants 2020, 9, 267.
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7.Ozçelik, B.; Aslan, M.; Orhan, I.; Karaoglu, T. Antibacterial, antifungal, and antiviral activities of the lipophylic extracts of Pistacia vera. Microbiol. Res. 2005, 160, 159–164, doi:10.1016/j.micres.2004.11.002.
8. La Camera, E.; Bisignano, C.; Crisafi, G.; Smeriglio, A.; Denaro, M.; Trombetta, D.; Mandalari, G. Biochemical Characterization of Clinical Strains of Staphylococcus spp. and Their Sensitivity to Polyphenols-Rich Extracts from Pistachio (Pistacia vera L.). Pathogens 2018, 7, 82, doi:10.3390/pathogens7040082.
* 文中部分图片来源于网络
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