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鼠—下丘脑单细胞悬液制备
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注 | 以下操作指南中涉及的消化酶以及实验方法仅供参考，实际应用过程中请根据具体情况进行细节上的调整。
组织背景介绍
下丘脑位于丘脑沟以下，形成第三脑室下部的侧壁和底部，占全脑的0.3%左右。它是植物神经的皮质下最高中枢，边缘系统、网状结构的重要联系点，垂体内分泌系统的激发处。可分为前区、内测区、外侧区、后区四个区，主要包括乳头体和结节部、视上部。下丘脑具有许多细胞核团和纤维束，内部以弥散的小细胞为主的室周中央灰质组成。
该方案中选则木瓜蛋白酶进行解离，木瓜蛋白酶对动植物蛋白、酯、酰胺等有非常强的水解能力，可以降解大多数蛋白质底物。对神经组织中细胞的损害更小，故在神经组织制备细胞悬液时，多数都使用木瓜蛋白酶。
材料和试剂耗材
实验流程
解剖下丘脑组织，组织置于预冷培养基中，切成小块，并去除非目的部分；
转移至含有 2mg/mL 木瓜蛋白酶的Hibernate A-Ca 培养基中，30℃下持续振荡培养 40min.；
用 5mL 预冷Hibernate-A/B27培养基洗涤；并用血清移液管研磨；
取出并过滤上清液，细胞悬液过 100μm 筛，并用预冷培养基清洗滤网；
将单细胞悬浮液加载到4层OptiPrep梯度上，并在4℃下以800 g离心 15min，以去除碎片。
收集级分2-4，并用 5mL Hibernate A/B27培养基和 5mL DPBS与0.01 % BSA洗涤。
将细胞以 200g 离心 3min，去除上清液，并重新悬浮在 0.4mL 含有0.01 % BSA的DPBS中。
台盼蓝染色 10μL 细胞悬液并计数质检。
结果展示
所获细胞悬液：活率大于 94%，结团率低，背景干净。
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