培养细胞单细胞悬液制备

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注 |  以下操作指南中涉及的消化酶以及实验方法仅供参考，实际应用过程中请根据具体情况进行细节上的调整。

背景介绍

一般细胞培养分为悬浮培养和贴壁培养，由于细胞的增殖有可能形成大小不等的细胞团块或连接成片。活体体内细胞当离体置于体外培养时大多数以贴壁方式生长，主要包括正常细胞（例如：成纤维细胞、巨噬细胞、神经胶质细胞、心肌细胞以及肝、肺、肾、乳腺、皮肤细胞等）和肿瘤细胞，一般用胰酶消化；临床上常见的脱落细胞经过简单离心过筛处理就能制备成单细胞悬液。

人培养细胞示意图

材料和试剂耗材

实验流程

贴壁细胞：

1. 将培养细胞用0.25 % ~ 5 % 胰蛋白酶消化1 ~ 5 min（根据室温情况而定），至光镜下见到贴壁细胞间出现筛状间隙为止，弃去消化液，加 PBS 液。

2. 用吸管将细胞从瓶壁上轻轻吹打下来，并移入离心管中。

3. 短时低速离心，即800~1000 r/min，5 min。

4. 弃上清，加pH 7.4的PBS液5~8 mL，低速短时离心，800~1000 r/min 离心3~5 min；重复 2~3次，以去除细胞悬液中的细胞碎片。

5. 加少许PBS液，将沉淀细胞轻轻吹打均匀。加固定液或低温保存待用。

脱落细胞：

1. 细胞洗脱到10 mL PBS液中，1500 rpm，5 min离心后，再用PBS液洗2次，800 rpm，离心2 min，弃上清；

2. 再加入PBS液5 mL，以300目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清；

3. 加少许PBS液混匀沉淀细胞，加固定液或低温保存备用。

结果展示

所获细胞悬液：活率大于97 %，结团率低，背景干净。

往期回顾

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