Agilent Seahorse XF分析仪的工作原理

Seahorse分析仪如何测定细胞外流量

Agilent Seahorse XF分析仪每隔大约5-8分钟测定氧消耗率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）。OCR是线粒体呼吸的指标，而ECAR在很大程度上是糖酵解的结果。 

Seahorse XF分析仪从微孔板内单层细胞的上方取出极少量（大约2 μL）培养基，对OCR和ECAR进行实时测定。 

细胞氧消耗（呼吸）和质子排出（糖酵解）导致“瞬时微室”中溶解氧和游离质子的浓度出现快速变化，这些易于测定的变化可以通过位于单层细胞上方200 μm的固态传感器探针来测定，每几秒钟测定一次。仪器在2-5分钟内测定浓度，然后分别计算OCR和ECAR。

在测定完成后，探针抬起，将更大体积的培养基与瞬时微室中的培养基混合，让细胞各种值回到基线水平。集成的给药系统能够以用户定义的间隔在每孔中依次加入四种药物。

XF分析如何开展

在XF分析开始之前，将细胞接种在XF细胞培养微孔板的各孔中。分析期间使用Seahorse提供的不含碳酸氢盐的培养基。分析卡盒中最多可以添加四种药物，以便在分析期间实现自动注射。首先，将分析卡盒放入分析仪，进行光学传感器的自动校准。接着，将细胞培养板插入仪器内。 

通常，在通过给药口加入抑制剂、刺激物、底物或药物之前，测定基线（初始）OCR和ECAR三到四次。OCR的单位是pmol/minute，ECAR的单位是mpH/minute。然后将预先装入分析卡盒给药口的药物由空气作用依次注射到每孔的培养基中。轻柔混合之后，多次测定OCR和ECAR。 

由于Seahorse XF测定是非破坏性的，故在多达四种不同药物依次注射到每孔的过程中，同一细胞群的代谢速率可反复测定。总的分析时间通常为60至90分钟。XF分析完成后，在同一块板上还可以开展其他类型的生物学分析，比如细胞活力测定。为了维持正常的细胞生理学，温度控制系统将细胞温度维持在37°C（或其他预设的温度）。 

Seahorse XF检测试剂盒及试剂

完整易用的Seahorse XF检测试剂盒及试剂提供了预先校准且预先检测的试剂，从而简化了细胞生物能量学，适用于细胞的代谢分型、线粒体呼吸、糖酵解和脂肪酸氧化分析。

您可以不信我们的话

自2006年推出以来，Seahorse XF技术已经出现在2500多篇同行评审的文献中。Seahorse XF技术的强大和实用让各个应用领域的研究人员能够更好地了解他们的细胞模型，并就代谢在各种疾病中的关键作用做出突破性的发现。

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