教你比葫芦画瓢！中山大学发表了: 人尿液细胞诱导为iPSC和iNSC实验方案,

特别声明

本平台推出文稿均出于非商业性的教育和科研目的，旨在传播学术研究信息、净化大学教育与科研生态环境。但声明该文仅代表原作者的个人观点并不意味着本公众号赞同其观点或证实其内容的真实性。如有异议或侵权，本平台将在第一时间处理。期望读者关注点赞《蝌蚪士》公益事业： 为苦逼科民发声、并贡献正义的智力；且为平民大众免费科普，使之走进科学、传承科学、壮大科学——人人都能成为真才实学的蝌蚪士 (主编| 赛德夫).

来源：程琳科学网博客

2017年10月30日，中山大学中山眼科中心向孟清教授团队程琳博士以第一作者在《Frontierin Molecular Neuroscience》杂志（IF=5.08）发表题为《Generation of Urine Cell-DerivedNon-integrative Human iPSCs and iNSCs: A Step-by-Step Optimized Protocol》的论文。

自从2012年中科院广州生物医药与健康研究院发表从尿液细胞诱导为诱导多能干细胞（iPSC）的实验方案以来，全球有较多的实验室利用该实验方案重复实验，以诱导生成人的iPSC。尿液细胞不仅具有取之不尽的细胞来源（除了肾衰病人），在进行成体细胞重编程时还具有容易跨越上皮细胞-间充质转化（EMT）诱导为iPSC的优势。本实验室在重复并总结前人的研究结果时发现，利用两个游离质粒DNA加4个小分子化合物，可以将诱导iPSC的时间大大缩短，并极大地提高了诱导的效率（约80克隆/孔）。利用这个方案诱导生成iPSC的时间只有从血液或皮肤成纤维细胞诱导iPSC时间的一半（10天+）。同时，中科院之前发表的尿液细胞可以诱导成神经组细胞（neuralprogenitor cells），在我们的实验中也得到证实，我们认为这些细胞是诱导神经干细胞（iNSC）。这样，在单个实验中，利用简单的电转或脂质法转染，通过调整培养基的成分浓度和诱导时间，控制生成iPSC、iNSC或两者皆有。

本研究站在前人研究的基础上，优化的实验方案详细而具体，对诱导过程中可能出现的陷阱和问题提供了解决方案。对需要将尿液细胞诱导为iPSC和iNSC的初学者或诱导有问题者能提供确实的帮助，欢迎大家参考并引用。有问题可以随时联系作者[e-mail]，谢谢！

论文链接：http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fnmol.2017.00348/full?&utm_source=Email_to_authors_&utm_medium=Email&utm_content=T1_11.5e1_author&utm_campaign=Email_publication&field=&journalName=Frontiers_in_Molecular_Neuroscience&id=296155

名词解释：上皮细胞-间充质转化（Epithelial-MesenchymalTransition， EMT），是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程。在胚胎发育、慢性炎症、组织重建、癌症转移和多种纤维化疾病中发挥了重要作用，其主要的特征有细胞黏附分子(如E-钙黏蛋白)表达的减少、细胞角蛋白细胞骨架转化为波形蛋白（Vimentin）为主的细胞骨架及形态上具有间充质细胞的特征等。通过EMT，上皮细胞失去了细胞极性，失去与基底膜的连接等上皮表型，获得了较高的迁移与侵袭、抗凋亡和降解细胞外基质的能力等间质表型。EMT是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。阐明调控恶性肿瘤细胞发生EMT过程的分子机制，明确其在恶性肿瘤的发生、发展、转移中的病理意义，并探索基于EMT关键分子的诊断方法及靶向EMT关键分子的治疗手段是肿瘤转移中EMT机制研究的关键科学问题。