【帕诺米克】代谢组检测项目样本制备要求汇总（建议收藏）

      样本制备的质量对于实验结果会产生直接影响，也是实验中非常重要的环节，帕诺米克对不同来源、不同类型、不同项目的样本制备要求进行了总结，方便各位老师参考。

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      1. 血液（血浆/血清）

      血液样本是代谢组学研究中常见的生物样本，血液样本采集方法主要分为临床采血方式和动物采血方式，临床采血方式主要有静脉采血法、皮肤采血法、动脉采血法；动物采血方式主要包括采集实验动物的尾部、眼眶静脉丛、颈静脉（动脉）、腹主动脉、眼球的血等。由于全血的稳定性差，存在异质性，所以一般检测中避免使用全血而选用血浆或血清。血浆是在全血中加入EDTA、肝素钠等抗凝剂防止纤维蛋白原凝固，血清是不加抗凝剂的全血在室温下放置30min自然凝固后，通过离心分离出的上清液。最后需检查血浆或血清是否有溶血，溶血会引起鸟氨酸、柠檬酸、苯丙氨酸等多种代谢物的改变，如果发生溶血需要重新采样。

      1) 血浆的制备

      用含有抗凝剂的采血管采集血液，采血后立即轻轻颠倒混匀采血管5-10次，确保抗凝剂发挥作用，采血后需要在30min内尽快离心分离出血浆（如不能尽快离心，需放在4℃冰箱保存，并且在2h内完成离心和分装，4℃条件下离心10min左右，离心力为1500g，取出采血管置试管架中，吸取上清液（血浆）200ul/例（不同项目类型送样量不同，如下表）置于已编号的EP管中，如此重复分装成多管血浆， 避免反复冻融，尽快将血浆保存于-80℃冰箱中。

      2) 血清的制备

      用不加抗凝剂的采血管采集血样，室温下放置30min凝血结束后，4℃条件下离心10min左右，离心力为1500g，取出采血管置试管架中，吸取上清液（血清）200ul/例（不同项目类型送样量不同，如下表）置于已编号的EP管中，如此重复分装成多管血清，避免反复冻融，尽快将血清保存于-80℃冰箱中。

项目类型	样本类型	建议送样量	最低送样量
GC-MS非靶	血浆/血清	300uL	150uL
LC-MS非靶	血浆/血清	200uL	100uL
脂肪酸	血浆/血清	200uL	100uL
短链脂肪酸	血浆/血清	300uL	150uL
氨基酸	血浆/血清	100uL	50uL
神经递质	血浆/血清	250uL	125uL
胆汁酸	血浆/血清	250uL	125uL
TMAO	血浆/血清	250uL	125uL

      2. 尿液的制备

      尿液样本主要分为临床尿液和实验动物尿液，临床尿液主要采晨尿、随机尿、计时尿（3小时尿、餐后尿和24小时尿）、导管尿、耻骨上穿刺尿等；实验动物尿液采集方法主要包括挤压膀胱、代谢笼收集、导尿管插管、输尿管插管、穿刺膀胱方法等。取尿液，静置在4℃保存，4℃条件下离心10min左右，离心力为1500g，吸取上清液（尿液）250ul/例（不同项目类型送样量不同，如下表）置于已编号的EP管中，如此重复分装成多管，避免反复冻融，尽快将尿液保存于-80℃冰箱中。

项目类型	样本类型	建议送样量	最低送样量
GC-MS非靶	尿液	250uL	125uL
LC-MS非靶	尿液	200uL	100uL
氨基酸	尿液	100uL	50uL

      3. 粪便的制备

      1) 人粪便样本的采集

      采集前先排尿。患者将粪便排于清洁、干燥、无吸水性的容器内，用小勺分别取两端和中部的内外部的粪便样本。采集粪便后，放入做好标记的冻存管中，样本量需要300mg/例（不同项目类型送样量不同，如下表），立即置于液氮中速冻；速冻后转运储存于液氮罐或-80℃冰箱中。

      2) 小鼠/大鼠粪便样本的采集

      动物粪便样本采集主要有自然排便法和肠道提取法。自然排便法是将实验动物置于代谢笼中，1只/笼，收集12h或24h粪便；肠道提取法是处死动物后，剖开腹腔，分离肠道，剪取大肠、盲肠、结肠或直肠提取内容物。采集粪便后（不同项目类型送样量不同，如下表），放入做好标记的冻存管中，立即置于液氮中速冻；速冻后转运储存于液氮或-80℃冰箱中。

项目类型	样本类型	建议送样量	最低送样量
GC-MS非靶	粪便	300mg	150mg
LC-MS非靶	粪便	300mg	150mg
脂肪酸	粪便	200mg	100mg
短链脂肪酸	粪便	300mg	150mg
氨基酸	粪便	100mg	50mg
神经递质	粪便	300mg	150mg
胆汁酸	粪便	300mg	150mg
TMAO	粪便	300mg	150mg

      4. 组织的制备

      切割下目标组织样本，用生理盐水清洗残留血液，滤纸吸干表面液体。在冰上将组织样本切割成20~50mg左右的小块，采用铝箔纸包括组织块，置于液氮中速冻约10s，在组织切除和处理30min内进行速冻。将速冻后的组织块分装至冻存管中，样本量需要200mg/例（不同项目类型送样量不同，如下表），速冻后的组织转运储存于液氮或-80℃冰箱中。

项目类型	样本类型	建议送样量	最低送样量
GC-MS非靶	动物组织	200mg	100mg
LC-MS非靶	动物组织	200mg	100mg
脂肪酸	动物组织	200mg	100mg
短链脂肪酸	动物组织	200mg	100mg
氨基酸	动物组织	100mg	50mg

      5. 细胞的制备

      样本量要求是细胞个数≥10⁷/例（如下表），细胞样本可分为贴壁细胞和悬浮细胞，贴壁细胞是取对数生长期细胞，去掉培养液，用适量预冷PBS清洗两遍，再加入少量PBS，用细胞铲刮下细胞，置于1.5mL离心管中，在1000g，4℃离心1min。悬浮细胞是取对数生长期细胞液，在1000g，4℃离心1min，去掉培养液，使用预冷PBS清洗细胞两遍，置于1.5mL离心管中，在1000g离心1min。收集到的细胞储存于液氮或-80℃冰箱中。

项目类型	样本类型	建议送样量	最低送样量
GC-MS非靶	细胞	107	5*106
LC-MS非靶	细胞	107	5*106
脂肪酸	细胞	107	5*106
氨基酸	细胞	107	5*106

      6. 唾液的制备

      样本量要求是1ml/例（如下表）。采集唾液前至少1h内不要抽烟、不吃东西、不喝水、不刷牙。采集前纯净水清洁口腔，采集自然状态下不受刺激分泌的唾液1ml左右。采集样本后在4℃下1500g离心15分钟，吸取上清，置于液氮或-80℃冰箱中储存。

项目类型	样本类型	建议送样量	最低送样量
GC-MS非靶	唾液	1ml	0.5ml
LC-MS非靶	唾液	1ml	0.5ml
氨基酸	唾液	1ml	0.5ml

      7. 植物样本的采集

      根据研究需求选择植物样本合适的采集部位，精确采集相应的部位，不同部位的样本量不同（如下表）。利用洁净的剪刀剪下所需部位，去离子水清洁样本表面杂质，滤纸吸干，不同的部位要分开置于冻存管中，并做好标记。分装至冻存管后应立即竖直置于液氮中速冻，速冻时间约30s。速冻后转运储存于液氮或-80℃冰箱中。

项目类型	样本类型	建议送样量	最低送样量
GC-MS非靶/ LC-MS非靶/靶向	植物叶片	2g	1g
植物根茎	1g	0.5g
植物果实	询问	询问

      8. 微生物的制备

      样本量要求是120mg菌体/例（如下表）。采集适量菌液置于无菌离心管中，在4000g，4℃下离心3min，分离菌体，用预冷PBS溶液清洗菌体两遍，4000g，4℃下离心3min，分离得到菌体，储存于液氮或-80℃冰箱中。

项目类型	样本类型	建议送样量	最低送样量
GC-MS非靶/ LC-MS非靶/靶向	微生物	120mg菌体	60mg菌体

      以上是常见样本制备要求的总结，您还可关注帕诺米克代谢组学公众号，回复“样本制备”，获取详细的样本制备流程。

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