色谱质谱助手-高效液相色谱-质谱日常维护（色谱篇）

LC-MS80%以上的问题来自液相端;，如果维护得当，可以保证仪器的正常的运行，达到事半功倍的效果。现就Agilent液相色谱质谱联用中的液相色谱的维护简要表述一下：

1. 为什么溶剂和样品要过滤？

溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。

色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管堵塞。

仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的柱塞杆的磨损。

2. 为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项？

HPLC用缓冲盐时，由于泵头内的缓冲盐溶液存在盐析现象，析出的细小盐粒非常坚硬，它附着在柱塞杆上，柱塞杆往复运动时，容易产生划痕，并磨损密封垫，造成漏液等故障现象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲盐的浓度在0.1M或大于0.1M时，必须使用该在线冲洗选项。

清洗液配制:  90%水+10%异丙醇。该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力，不能干涸。

3. 流动相使用前为什么要脱气？

流动相使用前必须进行脱气处理 ，以除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，色谱柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。

常用的脱气方法比较： 

（1）氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。

（2）加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。

（3）抽真空脱气法：易抽走有机相。

（4）超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10- 15min，此法效果最差。

（5）在线真空脱气法：真空脱机利用膜渗透技术， 在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。

4. 如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞，以及堵塞后的处理？

溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行，尤其水溶液或磷酸盐缓冲液（PH = 4-7）。以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。

（1）请严格执行溶剂过滤。

（2）请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液。

（3）如果应用许可，可在溶剂中加入5%甲醇。 

（4）在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹惰性气体如氮气，以隔绝空气。

（5）避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用棕色的溶剂瓶装水溶液或磷酸盐缓冲液。

5. 如何选择合适的泵头活塞密封圈？

泵头活塞的标准密封圈能适合于大多数应用，但使用正相溶剂（如正己烷），不适合使用标准活塞密封圈，特别是长时间使用时，需更换另一种不同的密封圈，我们建议使用聚四氟乙烯密封圈。

注意：聚四氟乙烯密封圈的压力范围为：0—200bar；建议在泵的压力限制中，将最大压力设为200bar。

6. 使用梯度比例发时要注意那些事项？

当盐溶液与有机溶剂溶液混合时，盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶，而不会出现沉淀。但是在比例阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来，通常，下面的阀接水相/盐溶液，上面的阀接有机溶剂，此法连接可有效使盐回落到盐溶液中，并被溶解。若颠倒过来，盐可能落在有机溶剂中，出现问题。

强烈建议：当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时，推荐将缓冲盐通道接在下面通道上，有机溶剂通道直接接在上方通道上；定期用水冲洗所有的通道，以除去阀口上可能出现的盐沉淀。

7. 溶剂

棕色玻璃瓶会避免藻类的生长。

经常过滤溶剂以免其中微粒永久性阻塞毛细管。

避免使用下述可腐蚀钢铁的 溶剂：

（1）碱金属卤化物及其酸溶液(如：碘化锂、氯化钾等)。

（2）高浓度无机酸，如硝酸、硫酸。

（3）可能含有过氧化物的色谱醇醚(如THF、二氧六环、二丙基乙醚)。这些在 使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物。

（4）含强络合剂的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。

（5）四氯化碳与2-异丙醇或四氢呋喃的混合液。

8. 如何简单判断脱气机脱气是否正常？

打开Purge阀，设定泵的流速2ml/min，提起当前所使用溶剂瓶内的溶剂过滤头，使之脱离液面一小段时间，此时溶剂传送管内会产生一小段气泡，放下过滤头，让此段气泡通过脱气机，如果脱气机正常，气泡应消失或缩小。

9. 如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？

关闭泵，拧开脱气机出口或比例阀入口管线,此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。

10. 如何简单判断比例阀是否内漏？

设定泵使用一个单独通路（A），打开Purge阀，流速5ml/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，观察这些通路内的溶剂是否随着流动，正常时均不应流动。

11. 何时应该更换Purge阀内的过滤白头？

使用纯水作流动相，打开Purge阀，流速5ml/min，观察系统压力，如果超过10bar，应该更换。

12. 泵压力不正常可能由那些原因引起？

气泡，主动阀故障，出口阀故障，密封垫或柱塞杆磨损，渗漏或堵塞，比例阀故障，传感器故障，使用比例阀混合时盐浓度太高

13. 怎样判断自动进样器的转子垫圈磨损？

将第四号管（排液的细塑料管）提起，运行样品时下应没有液体滴出，如果有液体滴出则转子垫圈磨损。

色谱现象：压力不稳，保留时间面积重性差，残留严重。

14. 漏液的主要原因？

（1）色谱柱未拧紧，多数发生再更换柱后。这时柱温箱会显示Leak。注意，柱温箱的漏液传感器在两加热块之间的中间位置。请用吸水纸确认，因为有时单用眼观察不易察觉。

（2）连接管路两端未拧紧，或连接管路断裂。

（3）进样阀漏液，如自动进样器转子垫圈磨损造成漏液。

（4）泵漏液，开泵后将手伸入泵底部，可感到漏液。

（5）冷凝水的形成，如果使用柱温箱的降温功能，可能会有冷凝水生成从而使柱温箱显示漏液。这种情况下可取消柱温箱的检漏功能(在工作站中的 instrument 菜单下选择more column thermostat 然后选择取消柱温箱的检漏功能)。

（6）流通池漏液。

15. 系统压力过高的原因？

（1） 首先拧开purge阀，以纯水作流动相并设流速为5ml/min若压力超过10bar，应先更换purge阀的虑芯。

（2）若purge阀的虑芯没有堵塞，卸下色谱柱，然后用一两通代替色谱柱，以水作流动相设流速为1ml/min。通常压力不会超过20bar，否则系统可能有堵塞。

（3）若上述的压力超过20bar，我们可按照从后到前的原则，也就是说先卸下进流通池的连接管接头，开泵后，若压力正常则流通池堵塞；若仍不正常可将这段管另一端也卸下，开泵后再观察压力情况。同样道理，我们就可以找到堵塞的地方。

（4）容易堵塞的地方：流通池入口管；自动进样器的针及针座；柱温箱 。

16. 系统压力过低或不稳定？

（1）首先拧开purge阀，设流速1~2ml/min后开泵，观察有无液体流出，若有再仔细观察液流是否有倒吸现象如不能确定可用量筒测量流速的准确性。

（2）如上述无液体流出，或流速不准多数为主动阀阀芯或主动阀故障，或泵有严重漏液。

（3）怎样是大致判断主动阀抑或其阀芯故障？可用以下方法：当泵运转时用手指轻捏主动主体，正常的主动阀能感到有节奏的脉动，如果没有，主动阀有问题。如果有则可以将主动阀阀芯取出进行超声波清洗，如仍有问题，可更换阀芯。注意，千万不要把整个主动阀放入超声波清洗这样会损坏主动阀。

（4）若上述流速准确但拧紧purge阀后压力不稳定，请仔细检查有无漏液。（通常漏液地方：各接口包括色谱柱，泵，进样阀等）。

17. 保留时间不稳定？

观察保留时间是否有规律的变化，并同时观察压力是否稳定？

（1）若压力稳定而保留时间呈有规律变化，多数是色谱柱未平衡好，特别是含有离子对试剂的流动相，需较长的时间去平衡。

（2）若压力稳定而保留时间无规律变化，请检查溶剂过滤头及真空腔是否有堵塞。再平衡色谱柱足够时间，如仍然不佳，可更换一色谱柱。

（3）若压力不稳定，请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内漏等。

18. 峰面积重现性不好？

观察压力是否稳定，以及观察峰面积变化是否有规律。

（1）若压力不稳定，请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。

（2）若压力稳定但峰面积呈无规律变化，请检查样品是否足够，确认样品的稳定性，必要时重新配制。检查进样阀是否漏液等。

（3）若压力稳定且峰面积呈规律变化，多数为色谱柱未平衡好。

19. 基线不稳定？

（1）基线漂移：色谱柱未平衡好，柱温未稳定，流动相变化等。

（2）基线噪音可能原因是：

流通池有气泡，流通池被污染；色谱柱和或系统受污染；灯能量不足。

         外界因素影响，如电源，温度和湿度，震动等。

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