赛诺菲设计新型三特异性抗体，CAR-T大神Carl H. June下场点评

近日，赛诺菲研究人员在nature cancer上发表文章“Trispecific antibodies enhance the therapeutic efficacy of tumor-directed T cells through T cell receptor co-stimulation ”，设计了一种新型的三特异性抗体用于肿瘤免疫治疗。CAR-T大神六爷Carl H. June发表文章“Trispecific antibodies offer a third way forward for anticancer immunotherapy”对该工作进行点评。

该三特异性抗体的设计为，同时靶向CD38/CD3/CD28。从作用机制上而言，该抗体的设计与已上市的安进公司T细胞衔接双抗Blinatumomab（CD3/CD19）是一致的，通过牵引T细胞杀伤肿瘤细胞。在靶点的设计上，增加了TCR/CD3复合物的共刺激分子CD28：

1、CD38为肿瘤表面抗原，其也可以是CD19、BCMA等其他肿瘤相关抗原，用于特异性识别识别肿瘤细胞；

2、D3作为T细胞共受体，用于激活细胞毒性T细胞和T辅助细胞，并介导T细胞对肿瘤细胞特异性杀伤；

3、CD28分子则是TCR/CD3复合物的共刺激分子，其信号能够Bcl-xL蛋白的表达，从而抑制T细胞死亡。CD28在T细胞的刺激、存活和增殖扮演重要的作用。

CD3/CD28的共刺激设计，与CAR-T细胞的设计有异曲同工之妙。

在分子结构设计上，其一侧的N端为靶向肿瘤抗原的Fab，另一侧的设计则是通过CODV（cross-over dual variable ）双抗技术平台同时靶向CD3/CD28。

CODV双抗平台技术最早见于赛诺菲在2016年在mabs上所发表文章，经过不同的排列组合、筛选和评估，确定通过4个linker对VL1/VL2/VH1/VH3以及恒定区进行串联。该结构能够形成良好的空间结构，不同靶点之间的识别不会相互干扰，并且具有较好的稳定性。

在CD3分子亲和力的选择上，采用了中等亲和力的抗体（KD～20nM）平衡了杀伤有效性以及细胞因子大量释放的安全心问题。

在Fc的设计上，其采用了IgG4亚型并进行了F234A L235A (FALA) 位点突变，进一步降低了与FcR的结合功能，通过什么方式形成异源二聚体并未可知。

在体内外试验，该分子表现出非常优异的肿瘤杀伤效果，并且在CD38低表达的肿瘤细胞上也具有出色效果。

六爷Carl H. June认为这个分子需要关注两个问题：

1、 细胞因子释放综合征（CRS）带来的安全性问题；

2、 这类分子在体内是否会产生免疫原性，带来药物快速被清除的问题。

确实这种形式的三特异性抗体的设计，其实类似于模拟了CAR-T的作用，CAR-T治疗过程中常见的CRS问题值得关注。尽管在动物猴模型中，皮下给药途径并没有观察到细胞因子相关的毒副作用（静脉注射则有），正常细胞表达CD38的细胞在短暂的降低后会回调，安全性问题仍需在后续的推进中密切关注。毕竟2006年TGN1412（CD28抗体）临床实验，所带来的惨案还历历在目。另外文中并没有对该分子的免疫原性问题进行评估和试验，抗体分子设计日趋复杂，许多结构与天然的IgG分子已经相去甚远，免疫原性问题需进行及早的预测和评估。

参考文献：

1、CODV-Ig, a universal bispecific tetravalent and multifunctional immunoglobulin format for medical applications；

2、Trispecific antibodies enhance the therapeutic efficacy of tumor-directed T cells through T cell receptor co-stimulation；

3、Trispecific broadly neutralizing HIV antibodies mediate potent SHIV protection in macaques；

4、https://www.nature.com/articles/d41586-019-03495-3