法庭科学DNA实验室检验规范 GAT 383—2014（20140509）
1、法医生物检材的提取、保存、送检规范GAT 1162—2014（20140509）
2、法医临床影像学检验实施规范 SFZ JD0103006-2014(20140317)
法庭科学DNA实验室检验规范 GAT 383—2014已经中华人民共和国公安部2014年5月9日发布，自2014年5月9日起施行。
目 录
前 言
1 范围
2 规范性引用文件
3 术语与定义
4 前期检验
5 DNA提取与纯化
6 DNA定量
7 人类DNA性别及STR（short tandem repeats）多态性分析
8 人类线粒体DNA测序
附录A （规范性附录）DNA的提取和纯化方法
附录B （规范性附录）常用试剂推荐配方
·前言
本标准按照GB/ T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准代替GA/T 383—2002《法庭科学DNA实验室检验规范》，与GA/T 383—2007相比主要技术变化如下：
——删除了定义“有机溶剂法”“Chelex法”“硅珠法”和“CTAB法”，将这部分内容移入正文中（见5.1、5.2、5.3和5.5，2002年版的2.2、2.3、2.4和2.5）；
——增加了“DNA提取”的术语和定义（见3.2）；
——增加了“遗传标记”的术语和定义（见3.3）；
——删除了案件受理有关的内容（见2002年版的第3章）；一删除了检材的提取和保存有关的内容（见2002年版的第4章）；
——删除了前期检验血痕检验种属试验一环状沉淀试验的有关内容（见2002年版的5.1.2）；
——删除了前期检验血痕检验种属试验一对流免疫电泳法的有关内容（见2002年版的5.1.3）；
——删除了前期检验血痕检验种属试验一金标试纸检验法的有关内容（见2002年版的5.1.4）；
——增加了前期检验血痕检验预检验中鲁米诺检验的有关内容（见4.1.1.2）；一增加了前期检验血痕检验确证检验中金标试纸检验法的有关内容（见4.1.2）；
——删除了前期检验精斑检验中预检验一酸性磷酸酶试验的有关内容（见2002年版的5.2.1）；
——增加了前期检验精斑检验中确证检验一金标试纸检验法的有关内容（见4.2.2）；
——删除了前期检验唾液斑检验的有关内容（见2002年版的5.3）；一删除了DNA提取PCR缓冲液处理法的有关内容（见2002年版的6.5）；将有机溶剂法、Chelex法、硅珠法和CTAB法的器材、试剂和方法有关内容移入附录（见附录A，2002版的6.1、6.2、6.3和6.4）；
——增加了DNA提取与纯化中的方法种类（见5.4、5.6、5.7、5.8、5.9、5.10、5.11、5.12和附录A）；一删除了DNA质和量的检测定量胶检测法的有关内容（见2002年版的7.2）；一删除了DNA质和量的检测人类DNA定量试剂盒的有关内容（见2002年版的7.3）；一增加了DNA定量其他定量方法的有关内容（见6.3）；
——删除了PCR反应的有关内容（见2002版的第8章）；
——删除了反应产物的检测的有关内容（见2002版的第9章）；
——增加了人类DNA性别及STR多态性分析的有关内容（见第7章）；
——删除了防污染措施、文档资料、检验周期的有关内容（见2002版的第11章、第12章和第13章）；
——增加了常用试剂推荐配方（见附录B）。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由全国刑事技术标准化技术委员会（SAC/TC179）提出并归口。
本标准主要起草单位：公安部物证鉴定中心。
本标准参加起草单位：上海市公安局、广州市公安局、北京市公安局、天津市公安局。
本标准起草人：叶健、周怀谷、刘超、赵兴春、陈松、刘雅诚、姜成涛、刘冰、匡金枝、张建、李彩霞、白雪。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
GA/T 383—2002。
法庭科学DNA实验室检验规范
1范 围
本标准规定了法庭科学DNA实验室检验应遵守的基本要求。
本标准适用于所有从事法庭科学检验的DNA实验室。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 27025—2008 检测和校准实验室能力的通用要求
GA 765—2008 人血红蛋白检测金标试剂条法
GA 766—2008 人精液PSA检测 金标试剂条法
3 术语与定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 前期检验 priorexamination
DNA检验前进行的预试验和确证试验。
3.2 DNA提取DNAextraction
将DNA分子从其蛋白及其他细胞物质成分中分离提纯的过程和方法。
3.3 遗传标记 geneticmarker
由遗传决定，并能够以一定的规律从亲代传给子代的生物学特征。
3.4 聚合酶链反应polymerase chain reaction；PCR
一个酶促的特定DNA片段体外扩增过程。
4前期检验
4.1 血痕检验
4.1.1预检验
4.1.1.1联苯胺试验
4.1.1.1.1试剂
联苯胺试剂配方如下：
a）联苯胺无水乙醇饱和液；
b）3%过氧化氢溶液；
c）冰醋酸。
配制方法见附录B。
4.1.1.1.2方法
取滤纸轻轻擦拭斑迹，分别加冰醋酸、联苯胺无水乙醇饱和液、3%过氧化氢溶液，立即出现翠蓝色为阳性反应。
4.1.1.2 鲁米诺检验
4.1.1.2.1试剂
鲁米诺试剂配方为：
a）鲁米诺粉末；
b）过氧化氢粉末。
4.1.1.2.2方法
按1：5比例，分别将鲁米诺粉末0.1g与过氧化氢粉末0.5g置喷壶中，加入100mL~200mL蒸馏水混合，喷洒斑迹，立即出现蓝色荧光为阳性反应。
4.1.2确证检验——金标试纸检验法
4.1.2.1试剂
确证检验主要试剂如下：
a）人血红蛋白检测金标试纸条；
b）纯水。
4.1.2.2 方法
见GA 765—2008。
4.2 精斑检验
4.2.1确证检验——精子检出法
4.2.1.1试剂
确证检验主要试剂如下：
a）1%酸性复红溶液；
b）1%美蓝溶液；
c）1%盐酸；
d）生理盐水。
4.2.1.2方法
取少量可疑斑迹用适量生理盐水浸泡后，离心取沉渣涂于载玻片上，干燥后分别用1%酸性复红溶液和1%美蓝溶液染色，1%盐酸和清水洗涤，干燥后镜检。精子头部被染成红色，而尾部被染成蓝色。
4.2.2 确证检验——金标试纸检验法
4.2.2.1试剂
确证检验主要试剂如下：
a）人前列腺特异性抗原检测金标试纸条；
b）纯水。
4.2.2.2 方法
见GA 766—2008。
5DNA提取与纯化
详见附录A。
5.1 有机溶剂法
通过酚-氯仿混合物萃取DNA溶液中的蛋白质类有机物质，保留DNA于水相溶液中的DNA提取方法。
5.2 聚苯乙烯二乙烯基苯树脂法
通过Chelex鳌合镁、钠和钾等离子，使降解DNA的核酸酶失去活性的DNA提取方法。
5.3 硅珠法
在高浓度的硫氰酸胍存在的条件下，通过二氧化硅微粒特异捕获有机质溶液中DNA分子的DNA提取方法。
5.4 磁珠法
在胍盐存在条件下，通过在硅胶外表涂上一层磁性树脂的磁珠，特异性的吸附细胞裂解液裂解后释放出DNA的DNA提取与纯化方法。
5.5 十六烷基三甲基溴化胺法
通过非离子型去污剂CTAB破坏细胞壁和细胞膜及硬组织，并与DNA形成复合物，分离DNA与蛋白质及多糖类物质的DNA提取方法。
5.6 硅胶膜吸附法
通过硅胶膜吸附细胞裂解液裂解后释放出DNA，并经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质的DNA提取与纯化方法。
5.7 FTA卡法
通过FTA卡裂解细胞释放DNA，从血液、口腔上皮细胞中获得DNA的方法。
5.8 全自动工作站法
采用全自动工作站结合上述提取、纯化方法进行DNA提取和纯化的方法。
5.9 乙醇沉淀纯化法
通过乙醇沉淀去盐，纯化DNA的方法。
5.10 异丙醇沉淀纯化法
通过异丙醇去多糖、蛋白，纯化DNA的方法。
5.11 其他商品化核酸提取和纯化试剂盒
参照试剂盒说明书操作。
5.12 自行开发的核酸提取和纯化方法
应按照GB/T 27025—2008的要求进行方法确认。
6DNA定量
6.1 紫外分光光度计法
6.1.1预置分光光度计零点。
6.1.2充分混匀样品，读取260nm和280nm的OD值。
6.1.3计算A260/A280比率，比率大于1.6表明DNA较纯。
6.1.4计算DNA浓度：
单链DNA：1OD=40μg/mL；
双链DNA：1OD=50μg/mL；
DNA浓度（μg/μL）=稀释倍数×A260×40μg/mL÷1000μL。
6.2 定量PCR仪定量
试剂和方法以说明书为准。
6.3其他定量方法
试剂和方法以说明书为准。
7人类DNA性别及STR（shorttandem repeats）多态性分析
7.1 器材及试剂
检验所用主要器材及试剂如下：
a）全自动荧光分析仪及配套试剂；
b）扩增仪；
c）移液器；
d）人类荧光标记STR复合扩增试剂盒（包括带有ABO分型及直接扩增）。
试剂配制方法见附录B。
7.2 方法
7.2.1人类荧光标记STR复合扩增试剂
7.2.1.1选用获得认证的商品化试剂盒或获得认证的直接扩增试剂盒。
7.2.1.2自行开发的试剂应按照GB/T27025—2008的要求经方法确认后方可使用于日常检案。
7.2.2 PCR扩增
7.2.2.1扩增反应体系及循环参数，以各试剂盒的说明书为准。
7.2.2.2设置阳性对照和阴性对照。
7.2.3 PCR反应产物的荧光检测
使用全自动荧光分析仪进行检测。器材、试剂、检测方法和数据分析以各试剂盒的说明书为准。
8人类线粒体DNA测序
人类线粒体DNA（mtDNA）的非编码区D环（D-Loop）含有两个变异率较高的高变区（High Variable Regions，HVR）I和IⅡ，本标准针对该两个区域HVRI和HVRII的测序，其他的DNA测序可参照本标准执行。
8.1 器材及试剂
检验所用主要器材及试剂如下：
a）全自动荧光分析仪及配套试剂；
b）扩增仪；
c）移液器；
d）PCR试剂：引物（D-Loop高变区I或高变区II）L1、H1、L2、H2（L2、H2的碱基序列范围比L1、H1小，并包含在L1、H1的范围内），dNTP，Taq酶，PCR缓冲液；
e）PCR产物纯化试剂盒；
F）测序试剂盒。
试剂配制方法见附录B。
8.2 方法
8.2.1样本DNA的扩增——Nested-PCR法
8.2.1.1 第一步扩增：25μL体系，取适量模板DNA，加入dNTP、引物L1和H1、PCR缓冲液、Taq酶，离心，PCR反应（反应参数根据具体引物的长度设定）。
8.2.1.2第二步扩增：50μL体系，取少量第一步扩增产物，加入dNTP、引物L2和H2、PCR缓冲液、Taq酶，离心，PCR反应（反应参数根据具体引物的长度设定）。
8.2.1.3 骨骼、毛干的测序从第一步开始，血液等富含DNA检材的测序从第二步开始。
8.2.2扩增产物的纯化
材料和方法以纯化试剂盒的说明书为准。
8.2.3 测序反应
材料和方法以测序试剂盒的说明书为准。
8.2.4荧光测序
使用全自动荧光分析仪进行测序，器材、试剂和方法以各说明书为准。
8.2.5结果分析
运用分析软件进行自动分析，以Anderson（1981）报道的线粒体DNA序列为标准序列，测得样本的碱基序列与其比对，得到该样本线粒体DNA高变区段碱基序列的特征，结合电泳图谱复核结果。
8.3 遗传学分析
线粒体DNAD-Loop区碱基序列为单倍型，进行遗传学数量分析时应依照单倍型基因频率统计进行计算。
计算公式：
式中：
X——线粒体DNA单倍型在群体中的频率；
P—一群体中任意两个体线粒体DNA多态区序列相同的可能性；
n——检测的样品数量；
h——单倍型多样性。
8.4 其他商品化检测试剂盒
参照试剂盒说明书操作。
·附录A
（规范性附录）
DNA的提取和纯化方法
A.1 有机溶剂法
A.1.1器材和试剂
主要器材及试剂如下：
a）高速离心机；
b）水浴或干浴；
c）移液器；
d）细胞溶解缓冲液；
e）蛋白溶解缓冲液；
f）DNA提取缓冲液；
g）TNE缓冲液；
h）TE缓冲液；
i）5×精子提取液；
j）纯化试剂盒（试剂和方法详见说明书）；
k）CentriconTM-100；
l）SDS；
m）DTT；
n）饱和酚和氯仿；
o）无水乙醇和70%乙醇溶液；
p）NaCl或NaAc；
q）蛋白酶K。
A.1.2方法
A.1.2.1血液
A.1.2.1.1取适量血液加入等体积细胞溶解缓冲液，混匀至透明。
A.1.2.1.2离心后去上清液，沉淀中加入蛋白溶解缓冲液匀浆。
A.1.2.1.3 加入SDS和蛋白酶K，37℃消化4h以上。
A.1.2.1.4加入等体积的酚、酚和氯仿（1：1混合）、氯仿各提取一次后，加1/10体积的NaCl或NaAc溶液和2.5倍体积的冷无水乙醇混匀，得到团状的DNA沉淀。
A.1.2.1.5离心去上清液，沉淀中加入70%乙醇混匀。
A.1.2.1.6离心去上清液，晾干后加入TE缓冲液或纯水备用。
A.1.2.2混合斑
A.1.2.2.1 剪碎带有精子的检材，加入适量TNE缓冲液，37℃保温0.5h~1h，加入SDS和蛋白酶K，37℃保温2h左右消化女性上皮细胞。
A.1.2.2.2底部带孔离心管离心分离去除载体，并去除上清液，沉淀物用TNE洗涤离心数次。
A.1.2.2.3 沉淀物内加入5×精子提取液、蛋白酶K，置37℃消化3h~4h。
A.1.2.2.4 以下同A.1.2.1.4、A.1.2.1.5、A.1.2.1.6。
A.1.2.3 组织
A.1.2.3.1取少量组织（脑、肌肉等）加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆。
A.1.2.3.2 加入SDS和蛋白酶K，37℃消化4h～6h。
A.1.2.3.3以下同A.1.2.1.4、A.1.2.1.5、A.1.2.1.6。
A.1.2.4 毛干
A.1.2.4.1 将毛干剪成3mm~5mm长，无水乙醇、纯水、无水乙醇各冲洗一次，晾干后加入DTT、SDS、蛋白酶K、蛋白溶解缓冲液，37℃消化至完全溶解。
A.1.2.4.2 加入等体积的酚、酚：氯仿（1：1混合）、氯仿各抽提一次，加入1/10体积的NaCl或NaAc溶液和2.5倍无水乙醇，混合后-20℃冷冻1h以上。
A.1.2.4.3 离心去上清液，沉淀中加入70%乙醇混匀。
A.1.2.4.4 离心去上清液，晾干后加入TE缓冲液或纯水备用。
A.1.2.5骨和牙齿
A.1.2.5.1 以手术刀刮净骨骼和牙齿表面垢物，用温热纯水冲洗两次，紫外光照射1h。再用锤子将牙齿砸成粉末和用电钻取骨密质和骨松质，并将其用研磨器进一步磨碎。
A.1.2.5.2 取适量骨或牙齿粉末，加入DNA提取缓冲液、蛋白酶K，于37℃消化过夜。
A.1.2.5.3 酚和氯仿提取，提取液置CentriconTM-100中离心浓缩后，加1/10体积的NaCl和2.5倍无水乙醇置-20℃冰箱过夜。
A.1.2.5.4离心去上清液，晾干加入TE缓冲液或纯水溶解，用纯化试剂盒纯化后备用。
A.2 Chelex法
A.2.1器材和试剂
主要器材及试剂如下：
a）高速离心机；
b）水浴或干浴；
c）移液器；
d）Chelex-100；
e）TNE缓冲液；
f）蛋白酶K；
g）SDS；
h）DTT；
i）纯水。
A.2.2方法
A.2.2.1 血液和血痕
A.2.2.1.1取少量血液或血痕加入适量纯水，室温30min以上。
A.2.2.1.2离心后去上清液，沉淀中加入Chelex-100，56℃消化30min以上（干浴传热效果较水浴差，故采用干浴时，时间适当延长）。
A.2.2.1.3煮沸8min以上，离心后置4℃冰箱内低温保存备用。
A.2.2.2 混合斑
A.2.2.2.1 剪碎带有精子的检材，加入适量TNE缓冲液，37℃保温0.5h~1h，加入SDS和蛋白酶K，37℃保温2h左右消化女性上皮细胞。
A.2.2.2.2 底部带孔离心管离心分离去除载体，并去除上清液，沉淀物用TNE离心洗涤数次。
A.2.2.2.3 沉淀物内加入Chelex-100溶液、蛋白酶K和DTT溶液，置56℃消化2h左右。
A.2.2.2.4 煮沸8min以上，离心后置4℃冰箱内低温保存备用。
A.2.2.3 组织
A.2.2.3.1 取少量组织（脑、肌肉等）加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆。
A.2.2.3.2 加入Chelex-100、蛋白酶K，56℃消化2h～3h。
A.2.2.3.3 煮沸8min以上，离心后置4℃冰箱内低温保存备用。
A.2.2.4唾液斑
A.2.2.4.1信封和邮票用灭菌的双蒸水润湿的棉签涂抹信封封口处和邮票背面，烟蒂直接剪取外层纸，剪碎后加入Chelex-100、蛋白酶K，56℃消化1.5h以上。
A.2.2.4.2煮沸8min以上，离心后置4℃冰箱内低温保存备用。
A.2.2.3组织
A.2.2.3.1取少量组织（脑、肌肉等）加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆。
A.2.2.3.2加入Chelex-100、蛋白酶K，56℃消化2h～3h。
A.2.2.3.3煮沸8min以上，离心后置4℃冰箱内低温保存备用。
A.2.2.4睡液斑
A.2.2.4.1 信封和邮票用灭菌的双蒸水润湿的棉签涂抹信封封口处和邮票背面，烟蒂直接剪取外层纸，剪碎后加入Chelex-100、蛋白酶K，56℃消化1.5h以上。
A.2.2.4.2煮沸8min以上，离心后置4℃冰箱内低温保存备用。
A.2.2.5毛发
A.2.2.5.1毛根剪取毛发的毛根部分5mm~10mm，毛于则剪成3mm~5mm长，无水乙醇、水、无水乙醇各冲洗一次，晾干后加入Chelex-100、蛋白酶K、DTT，56℃消化至完全溶解。
A.2.2.5.2煮沸8min以上，离心后置4℃冰箱内低温保存备用。
A.2.2.6骨和牙齿
A.2.2.6.1研碎的牙髓或骨髓，加入Chelex-100、蛋白酶K溶液，56℃消化过夜。
A.2.2.6.2煮沸8min以上，离心后置4℃冰箱内低温保存备用。
A.3 硅珠法
A.3.1器材和试剂
主要器材及试剂如下：
a）高速离心机；
b）水浴或干浴；
c）移液器；
d）吸附液；
e）漂洗液；
f）硅珠悬液；
g）TES缓冲液；
h）十二烷基肌氨酸钠；
i）SDS；
j）DTT；
k）蛋白酶K；
1）无水乙醇和70%乙醇；
m）双蒸馏水。
A.3.2方法
A.3.2.1血液和血痕
A.3.2.1.1取少量血液和血痕，加入TES缓冲液和十二烷基肌氨酸钠，煮沸5min以上，血痕离心去载体。
A.3.2.1.2加入吸附液，混和后加入硅珠悬液，混和后室温15min左右。
A.3.2.1.3离心去上清液，加入漂洗液，混合。
A.3.2.1.4离心去上清液，加入冷70%乙醇，混合。
A.3.2.1.5离心去上清液，加入TES，56℃保温10min以上。
A.3.2.1.6离心后置4℃冰箱内保存备用。
A.3.2.2混合斑
A.3.2.2.1剪碎带有精子的检材，加入适量TES缓冲液、SDS和蛋白酶K溶液，37℃消化2h左右。
A.3.2.2.2去载体，离心去上清液，TES缓冲液洗涤沉淀物数次。
A.3.2.2.3加入TES缓冲液和十二烷基肌氨酸钠，煮沸5min以上。
A.3.2.2.4 离心后上清液按A.3.2.1.2~A.3.2.1.6操作进行。
A.3.2.3毛发和指（趾）甲
A.3.2.3.1毛发或指（趾）甲分别用双蒸馏水和无水乙醇洗涤，剪碎后加入TES缓冲液、十二烷基肌氨酸钠和DTT溶液，56℃消化至完全溶解。
A.3.2.3.2离心后上清液按A.3.2.1.2~A.3.2.1.6操作进行。
A.3.2.4骨和牙齿
A.3.2.4.1取适量骨或牙齿粉末（见有机溶剂提取法）分别用TES缓冲液和EDTA洗涤，加入TES缓冲液、十二烷基肌氨酸钠和蛋白酶K、DTT溶液，56℃消化过夜。
A.3.2.4.2离心后上清液按A.3.2.1.2~A.3.2.1.6操作进行。
A.4 磁珠法
A.4.1器材和试剂主要器材及试剂如下：
a）磁架；
b）旋涡振荡器；
c）干浴或水浴；
d）移液器；
e）磁珠试剂盒（试剂和方法详见说明书）；
f）纯水。
A.4.2方法
A.4.2.1取适量检材，加入适量裂解液95℃~100℃ 30min以上。
A.4.2.2去除载体，加入磁珠液，混合，室温5min左右。
A.4.2.3旋涡振荡后置磁架上，去液体。
A.4.2.4裂解液洗涤后置磁架上，去液体，重复3次左右。
A.4.2.5室温下空气干燥5min~10min，加适量纯水，65℃5min左右。
A.4.2.6混合后置磁架，将DNA溶液吸出备用。
A.5 CTAB法
A.5.1器材和试剂
主要器材及试剂如下：
a）高速离心机；
b）水浴或干浴；
c）移液器；
d）CTAB提取缓冲液；
e）氯仿/异戊醇（24：1）；
f）MicroconTM-100；
g）纯化试剂盒（试剂和方法详见说明书）；
h）纯水。
A.5.2方法
A.5.2.1取适量骨或牙齿粉末（见有机溶剂提取法），加入CTAB提取缓冲液，室温过夜。
A.5.2.2 65℃保温1h以上，离心后保留上清液，加入等体积的氯仿/异戊醇，离心后保留上清液。
A.5.2.3上清液加入MicroconTM-100中，离心浓缩。
A.5.2.4浓缩液进行纯化，纯化试剂和方法以说明书为准。
A.6 硅胶膜吸附法
A.6.1器材和试剂
主要器材及试剂如下：
a）高速离心机；
b）水浴或干浴；
c）移液器；
d）硅胶膜试剂盒（试剂和方法详见说明书）；
e）无水乙醇；
f）纯水。
A.6.2方法
A.6.2.1取适量检材，加入适量裂解液85℃10min以上。
A.6.2.2加蛋白酶K，混合，56℃保温1h以上。
A.6.2.3过硅胶膜柱纯化。
A.6.2.4加纯水洗脱，洗脱液备用。
A.7 FTA卡法
A.7.1器材和试剂
主要器材及试剂如下：
a）高速离心机；
b）移液器；
c）纯水。
A.7.2方法
A.7.2.1从FTA卡样品区剪取适量血斑，加入纯水，浸泡5min左右，去浸泡液，重复两次。
A.7.2.2干燥待用。
A.8 全自动工作站法
器材、试剂和方法以说明书为准。
A.9 乙醇沉淀纯化法
A.9.1器材和试剂
主要器材及试剂如下：
a）高速离心机；
b）移液器；
c）10mol/L醋酸胺溶液；
d）无水乙醇和70%乙醇；
e）纯水。
A.9.2方法
A.9.2.1在DNA溶液中加入0.2倍体积10mol/L醋酸胺溶液和2倍体积冷的无水乙醇。
A.9.2.2离心，去上清液。
A.9.2.3 70%乙醇洗涤沉淀2次，离心收集沉淀。
A.9.2.4加入适量纯水或TE溶液，置4℃冰箱内低温保存备用。
A.10 异丙醇沉淀纯化法
A.10.1器材和试剂
主要器材及试剂如下：
a）高速离心机；
b）移液器；
c）66.7%异丙醇和75%异丙醇；
d）纯水。
A.10.2.1在DNA溶液中加入9倍体积66.7%异丙醇。
A.10.2.2离心，去上清液。
A.10.2.3加入75%异丙醇，混合，离心，去上清液。
A.10.2.4干燥后，加入适量纯水，置4℃冰箱内低温保存备用。
·附录B
（规范性附录）
常用试剂推荐配方
B.1 联苯胺试剂
B.1.1联苯胺无水乙醇饱和液（50mL）加冰醋酸5滴~6滴。
B.1.2 3%过氧化氢（30%过氧化氢1mL加纯水9mL）。
B.2 细胞溶解缓冲液（CLB）
0.64mol/L蔗糖，0.01mol/LMgCl2，0.02mol/LTris-HCl（pH7.6），2% TritonX-100。
B.3 蛋白溶解缓冲液（PLB）
75mmol/L NaCl，24mmol/LEDTA-Na2（pH8.0）。
B.4 DNA提取缓冲液
10mmol/L Tris-HCl（pH8.0），10mmol/L EDTA，100 mmol/L NaCl，2%SDS，39 mmol/L DTT。
B.5 TNE缓冲液
10 mmol/L Tris-HCl，5 mmol/LEDTA（pH8.0），100 mol/L NaCl。
B.6 TE缓冲液
10mmol/L Tris-HCl（pH7.5），1mmol/L EDTA。
B.7 5x精子提取液
50mmol/LTis-HCl，50 mmol/LEDTA（pH8.0），500mmol/L NaCl，10%SDS溶液，0.5mol/L DTT。
B.8 硅珠法吸附液
12g硫氰酸胍、10mL0.1mol/LTris-HCl（pH6.4）、0.8mL0.5 mol/L EDTA、0.5mL Triton X-100。
B.9 硅珠法漂洗液
12g硫氰酸胍、10mL0.1mol/LTris-HCl（pH6.4）。
B.10 硅珠悬液
0.06g二氧化硅、1mL纯水。
B.11 TES缓冲液
1mL 1mol/LTris（pH8.0）、2mL 5 mol/L NaCl、2 mL 0.5 mol/L EDTA（pH8.0）、95mL纯水。
B.12 CTAB提取缓冲液
20gCTAB（十六烷基三甲基溴化胺）、1mol/LTris-HCl（pH8.0）100mL、0.5 mol/L EDTA（pH8.0）40mL、NaCl81.82g，定容至1L，使用前加入4mL2-巯基乙醇。
戴卫祥 律师
戴卫祥，男，辽宁东亚律师事务所合伙人，三级律师，工学、法学学士学位。现任辽宁省律师协会政府法律顾问专业委员会委员、辽宁省省级人民监督员，大连市律师协会房地产与建设工程法律专业委员会副主任，大连市司法局法律顾问。
2001年从事法律工作，具有多年工作经验、律师执业经验及4年工程建设现场管理经验，先后担任恒大集团大连公司、辽宁公司监察室主任。执业以来，代理过建设工程鉴定、刑事鉴定、机动车交通事故鉴定、医疗损害及医疗产品质量鉴定、消防工程鉴定、环境损害鉴定等各类司法鉴定案件，积累了丰富的司法鉴定办案经验，并成功代理过多起通过司法鉴定确定无罪的刑事、司法鉴定行政确认等案件，在司法鉴定专业有深入、系统的研究和实践。
执业期间，秉承“忠实、勤勉、认真、专业”的执业理念，为多家企业及个人办理几百起成功案件，以认真细致地专业服务，赢得了当事人的一致认可和信赖。
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