陈老湿聊技术--春风十里，不如你！

——Octet平台分析结合位点或抗原表位

春暖花开，蓝天白云，一片美好~~~陈老湿不由得诗兴大发：

寒雪梅中尽，春风柳上归……

花开红树乱莺啼，草长平湖白鹭飞……

等闲识得东风面，万紫千红总是春……

一片两片三四片，五片六片七八片，九片十片十一片，飞入草中都不见……

哎~不对不对，这诗不对题呀~ 哈哈，不好意思，陈老湿兴奋过度了。。。

言归正传，陈老湿，聊起来！

前一期我们介绍了中科院微生物所的文章，讲到了其中抗体结合位点竞争实验的数据，也就是Epitope Binning实验，那么为什么要做这个呢？

因为，蛋白分子的结合位点或者抗体结合抗原表位（即抗原决定簇），决定了蛋白或抗体的功能活性，在蛋白结构研究或者抗体研发中占据重要的地位。

该怎么做呢？通常来讲，有3种方法：随机法(In-Tandem Assay)、三明治法(Classical Sandwich Assay)和预混法(Premix Assay)。

随机法(In-Tandem Assay)：

Biosensor固化一个纯化的抗原，接着结合一抗至饱和，然后与二抗进行竞争。这既可以用于杂交瘤上清抗体，又可以检测纯化过的抗体。操作简单方便。通常推荐使用捕获类传感器，比如，AHC，AMC，Anti-His，Anti-GST等。因为这将尽可能避免抗原本身结构改变或者无序性导致的结合位点封闭或重叠等。

三明治法(Classical Sandwich Assay)：

Biosensor固化一抗，接着与抗原孵育结合，然后与二抗进行结合检测。这同样可以用于粗样品或者纯化过的样品。这种实验里，抗原是不会形成饱和信号的，剩余的结合位点供二抗结合。但是抗原本身需要是单体或者均质样品，如果是多聚体或异质样品，则有可能会出现假阳性的结果。

预混法(Premix Assay)：

通常只能用于纯化的样品进行实验。首先将一抗固化，然后结合预混好的二抗和抗原。要求二抗与抗原的预混孵育4~5h。这个方法不受抗原是否是单体后均质样品的影响，是对其他两种实验的非常好的验证或补充实验。

方法好多呀，But，乱花渐欲迷人眼……

什么时候选择什么方法呢？让陈老湿为你指点迷津：

简而言之，言而简之：先看抗原本身是否单体结构，再看抗体是否是纯化样品。

如果都不知道怎么办，那陈老湿表示：凉拌吧，咱一起喝一杯得了。

大不了都试一遍喽，吼吼……

有了方法还不行，还得会分析数据呀，做Binnin，date都是海量海量的做呀，总不能一个一个配对分析吧？

嘿嘿，陈老湿笑了：Binning分析哪家强？Octet软件来帮忙！！！

请看图——Octet独家Epitope Binning分析模块！！！

对的，你没有看错，海量配对数据，分析只要4步！！！额滴神呐！！！

请看结果：

43对抗体竞争表位分析，一分钟出报告！！！红蓝矩阵，显而易见！！！

吃瓜群众说了，有什么大不了的，ELISA也可以做啊，SPR也可以做啊……

问题是它们做不了粗样品啊，杂交瘤怎么办？噬菌体怎么办？细胞株怎么办？当然它们的速度也太慢了！Octet只需6个小时搞定，它们至少得24个小时啊！

那正是：“春水初生，春林初盛，春风十里，不如你！”

轻松，洒脱，好不自在~~~ 陈老湿 已成 陈老诗~~~

如需了解详细信息，请参考www.fortebio.com网站learning板块下的

《AN16 Cross-competition or Epitope Binning Assays on the Octet HTX System》（点击【阅读原文】）。