一篇4分文章教你国自然热点TOP20发文思路

近年来肿瘤干细胞已成为国自然热点TOP20中的一员。越来越多的肿瘤研究中发现在预后差，易复发的肿瘤组织中存在一群有自我更新能力的细胞，研究人员将他们认为是肿瘤发生的源头，它类似于干细胞的功能导致癌症发生。今天小编就带来一篇肿瘤干细胞的研究。这篇文章发表在IF=4的CARCINOGENESIS上，虽然影响因子不算太高，但是可以透过这篇文章理清肿瘤干细胞的研究思路和实验方法。

一、临床数据研究——TIPE1的表达与大肠癌患者预后的关系

作者发现TIPE1在癌旁的正常结肠组织中表达，而在癌组织中低表达。IHC评分进一步验证并且TIPE1的表达与肿瘤分级呈负相关。此外，TIPE1的表达与结直肠癌患者生存率呈负相关。

结论：结果表明TIPE1表达下调，将成为大肠癌患者的预后指标。

二、细胞表型——TIPE1抑制CRC细胞系的干细胞样能力

Wb和q-PCR检测到TIPE1 mRNA和蛋白在大多数大肠癌细胞系中表达下调。在HCT116和HT29细胞中构建过表达细胞系。Wb验证过表效率。CCK8显示TIPE1表达显著抑制过表细胞的增殖。之后作者进行了干细胞成球实验，结果显示TIPE1过表达的CRC细胞的集落数减少，成球数量也减少。在其他细胞系中也有相同结果。Wb过表细胞中CSC相关标志物(ALDH、CD44、CD133和SOX-9)表达降低。

结论：TIPE1对大肠癌细胞中干细胞形成起抑制作用。

三、动物实验——TIPE1对小鼠结肠肿瘤生长的影响

之后作者利用过表细胞系进行小鼠荷瘤实验，WB和HE染色证实TIPE1在肿瘤中过表达。同时HCT116细胞中TIPE1的表达显著降低了肿瘤体积和重量。使用HT29细胞也得到相同结果。

结论：体内数据证实了TIPE1在结直肠癌中的抗肿瘤作用。

四、动物实验——TIPE1对小鼠大肠癌致瘤性的抑制作用

将受到抑制的干细胞注射到裸鼠两侧，利用不同细胞数量确定致瘤频率的潜在差异。当注射1×106和2×106细胞时，TIPE1有效地减少了HCT116细胞的肿瘤体积和重量。当注射40000个细胞时，没有肿瘤形成。根据注射数量计算出对照细胞启动细胞频率为1/87594，过表细胞启动细胞频率为1/214728。

结论：TIPE1抑制肿瘤干细胞成瘤。

五、信号通路探究——TIPE1调控Wnt信号通路

作者利用q-PCR检测到TIPE1在细胞中的过表达显著抑制了Wnt/β-catenin途径的下游靶基因MYC、CCND1、Twist和MMP7的表达。作者发现Wnt/β-catenin通路的激活有效地减弱了TIPE1对肿瘤干细胞克隆形成和球体形成的抑制作用，而沉默Wnt/β-catenin通路则作用相反。对Marker的WB实验也验证上述结果。

结论：Wnt/β-catenin信号通路在TIPE1抑制大肠癌干细胞中起着必要的作用。

六、分子机制研究——TIPE1直接靶向并促进大肠癌中β-连环蛋白的降解

作者进一步研究发现β-catenin蛋白在过表达细胞中受到显著抑制，HE染色验证结果。作者还证明在大肠癌组织中，TIPE1和β-catenin之间是负相关。然后进行了CO-IP实验，表明TIPE1直接与β-catenin相互作用。此外，TIPE1诱导的β-catenin表达的降低可被特异性蛋白酶体抑制剂MG132减弱。作者加入环己酰亚胺后发现β-catenin蛋白在过表细胞中的降解速度更快。此外，利用双荧光素酶的检测表明，TIPE1诱导Wnt/β-catenin信号的转录活性显著降低。

结论：TIPE1以蛋白酶的方式直接靶向并促进β-连环蛋白的降解。

七、分子研究验证——β-catenin在TIPE1抑制大肠癌细胞类干细胞能力中的作用

作者利用挽救实验将β-catenin过表达系统感染TIPE1过表细胞中，发现过表达β-catenin可以有效地减弱TIPE1对HCT116细胞克隆形成和球体形成的抑制作用。WB结果表明，β-catenin的表达挽救了TIPE1介导的细胞中ALDH，CD133、CD44，SOX-9等肿瘤干细胞Marker的下调。

结论：β-catenin可以有效抑制TIPE1过表达大肠癌干细胞的干性。

研究思路：

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