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用于菌群结构谱或宏基因组测序分析的实验动物肠道微生物取样方法

2017-06-30 江舜尧 微生太

一、准备材料

超净工作台,棉花,酒精,镊子;无菌冻存管, mark笔,一次性手套, 自封袋;冰或冰袋或干冰,冰盒。 以上是粪便收集方法中所用物品,如果取肠道内容物的话另外准备解剖剪等。

二、粪便收集方法

  1. 超净工作台灭菌15分钟,通风5分钟,酒精擦拭工作台桌面(实在没有超净工作台就尽可能找洁净的场所,尽量避免外源菌污染);


  2. 在无菌冻存管管盖和管壁上都写上样品名称,注意,样品名称只能用英文字母或阿拉伯数字或两者的组合,而且字符数不小于3且不大于9;

  3. 腹部按摩法促使动物(以大鼠为例)在超净工作台排便,至少两粒粪便,每粒粪便保存在一个无菌冻存管中,其中一粒送给北京微生太科技有限公司(简称微生太),另一粒自己保存在-80℃冰箱备用;如果是小鼠,粪便粒数加倍,其他动物粪便量参考大鼠即可;

  4. 根据分组等情况,将冻存管保存在自封袋中,自封袋缓存在冰上,以避免菌群生长;

  5. 酒精擦拭工作台桌面,继续取样;

  6. 样品采集后2小时内保存到-80℃冰箱;

  7. 所有样品采集完毕后联系微生太取样。微生太将派送干冰到样品所在地,将样品放进派送干冰的泡沫盒,封严后交给物流师傅既可。

 三、肠道内容物收集方法

其他步骤参考“粪便收集方法”,第三步参考方法如下:解剖动物腹部,取出肠道,剪开选定的肠段,挤出该肠段的肠道内容物于无菌冻存管中,体积至少相当于两粒大鼠粪便,混匀后分装成两管,其中一管送给微生太,另一管自己保存在-80℃冰箱备用。注意用酒精棉球和酒精灯灭菌后再取下一只动物的样品。



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