文献分享丨如何用一台LC-MS同时检测有机相和水相提取物？

2017-12-13 代谢组学分享平台

组学研究都在尝试利用分析技术提高检测化合物的数量，即能够更加全面地获取到目标分析物的信息。全面的获得代谢物的信息是非靶向代谢组学应用的一个目标，但是由于代谢物的物理化学性质差异很大，使得全面的检测面临着一些挑战。
其中一个解决方法是利用两相溶剂提取法来提取待测样本，这种方法可以从一个样本中提取出大量具有极性互补的化合物，其中有机相中包含大量磷脂类化合物，水相中含有较多的初级和次级代谢产物。为提高检测到代谢物的数量，接下来有机相和水相提取物将被分别注入仪器进行检测，分析时间也随之加倍。
为了节省实验的时间，作者提出了一种新的进样方法 Stacked Injection of Biphisic Extraction （SIBE）暂且翻译为叠加进样，可以实现同时对有机相和水相提取物进行检测。
结果显示，在没有明显增加分析时间的前提下，SIBE提取的化合物的总峰面积比单一溶剂提取的化合物提高三倍多。此外，相比于单一溶剂提取法，SIBE的检测到的化合物的峰面积RSD值稍有升高，但是保留时间的稳定性明显提高。
当我们想要检测到更多的代谢物时，此方法是一种切实可行的改善手段。

全文最重要的就是作者提出的这个叠加进样SIBE，那我们就通过示意图了解下具体的进样方法：

a为传统的分析方法，针对有机相和水相提取物分别进行分析，分析时间也随之加倍。
b为作者提出的进样方法，先将有机相提取物进样，但是不运行洗脱梯度，以初始流动相比例持续一分钟，保证有机相的磷脂类化合物任然在柱头位置；随后，将水相提取物注入同一根柱子，开始运行洗脱梯度。（图中流动相B为乙腈）
这样就可以同时对有机相和水相提取物进行分析，而且只是增加了很短的分析时间。

作者以葱叶组织为研究对象，分别对比了甲醇提取物，有机相提取物，水相提取物的色谱图，以观察不同提取方法对提取到的代谢物的影响。

此外，作者也对比了，将有机相提取物和水相提取物进行混合后再进样，和使用叠加进样法进样对检测的影响。

通过对比可以发现，不管是峰的数量还是峰的强度，SIBE都可以提供较好的检测结果。

作者又针对所有检测到的化合物做了对比。

以上是以葱叶提取物为例做的比较，作者之后又使用人体血液样本，牛的肌肉组织以及花粉样本作为研究对象进行比较，也获得了类似的结果。

最后作者也指出，虽然文章中所建立的方法达到的检测广度还无法和多平台分析相比，但是由于仪器的费用较高，而且消耗很多的时间，多平台分析并不是每个研究者都可以进行的。
所以，如果研究者有资金和分析时间的限制，同时又想达到广泛的检测生物样本中的化合物，SIBE在使用一台仪器的前提下，为全面检测提供了另外一种选择。