流式细胞术实验 protocol 合集

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流式细胞术是非常让人着迷的实验——高速客观、结果稳定、具有统计学意义，能够处理复杂样本并同时获取多种参数。

今天丁香实验给大家整理了流式细胞术从「实验设计」到「结果分析」的全流程 protocol，建议转发收藏！

如果你是全新新手小白，建议先看以下实验讲解视频了解实验原理，👉

第一步 设计你的流式细胞实验

很多同学在实验设计的时候就埋下了隐患，最常见的问题就是——对照设置不合理，最后导致整体实验失败或数据不理想。

流式对照至少有 5 种。

生物学对照，空白对照，同型对照（Isotype control），补偿对照（也叫单阳性对照）和 FMO 对照，主要目的是为了避免出现的假阳性或假阴性结果。

看不懂以上对照的含义也没关系，我们以一个具体的凋亡实验来看看如何设置对照组：

第二步 细胞悬液样本制备

流式细胞术的分析检测建立在单个细胞的基础上，所以制备合格的单个分散的细胞悬液是非常关键的一环。

对不同来源和不同形式的样品，根据各种样品的特点可选择不同的分散方法。

单层培养细胞、血液、各种脱落细胞等样品

标本经过简单的制备悬液，离心分离处理，就可以得到分散较好的单个细胞悬液，是理想的流式细胞术检测对象。

不同组织来源的实体组织标本

采用酶消化法、机械法和化学试剂处理法来分散细胞。

石蜡包埋组织单细胞悬液

可使大量存档的临床资料重新得到研究与利用，从而扩大了流式细胞术的应用范围。样品制备一般通过切片、脱脂、水化、消化及终止消化后过滤再收集细胞悬液，去除碎片的单细胞悬液用 70％ 乙醇固定保存。

第三步 流式检测操作流程

实验目的不同，检测的数据也各不相同，以下是一些常用实验方法，建议收藏：

很多同学第一次操作流式细胞仪器的时候非常紧张，生怕哪一步做错，nong坏了上百万的实验设备。

仪器的操作确实有很多讲究，比如：

「检查供液槽和废液槽：供液槽应含足够的仪器缓冲液，废液槽应在上次使用后清洗干净。」

「使用后的清洗  所有样品测定完后，要进行仪器的清洗。」

流式细胞仪器使用方法和流程已帮大家做好梳理：

第四步 流式检测结果分析

实验结果图通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种。

由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。不过很多新同学很难读懂图片代表的含义。

想要了解「Gate」和 「Regin」？流式图中的阴/阳（N/P）如何划分?坐标轴的意义？二维图怎么看？等等问题。

一起看看流式细胞术实验结果如何解读：

以上就是流式细胞实验设计、操作指南指导合集，如果你是实验小白可以收藏、转发文章，在做实验的时候按照流程一步步操作。

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内容策划｜Olaf

图片来源｜丁香实验设计团队