综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案

前  言

目前全球已有8款CAR-T药物相继获批上市，其中6款获得美国FDA批准，2款获得中国NMPA批准。CAR-T疗法在B细胞白血病或淋巴瘤患者中的治疗效果，改变了抗癌疗法，为难治性患者提供了潜在的治疗选择。但是，CAR-T疗法的一些瓶颈限制其广泛应用，如毒副作用严重、抗原逃逸、治疗持续性、异质性等，特别是在实体瘤中治疗效果有限。因此，全球的科研人员还在通过不断的研究，以使其能够得到更广泛的应用。

✦ 义翘神州CAR-T开发解决方案

作为一家专注于为全球生物医药领域提供关键试剂和技术服务的高新技术企业，义翘神州特地推出了综合性的CAR-T细胞疗法开发解决方案，全方位地支持客户更方便、更快速地完成从早期靶点发现到临床前研究的每一个阶段。

CAR 开发

义翘神州CAR-T开发解决方案

• scFv候选分子开发：scFv抗体库构建平台、Beacon®单B细胞发现平台、流式单B细胞发现平台、杂交瘤开发平台

• scFv候选分子筛选：scFv抗体亲和力检测 （SPR/BLI）、检测用过表达细胞株构建

• 靶点蛋白：250+ CAR-T热门靶点蛋白，涵盖荧光标记、生物素标记和无标记形式，高活性，高批间一致性，更接近于天然蛋白结构。

• 蛋白表达：哺乳动物瞬时表达、杆状病毒-昆虫表达、大肠杆菌蛋白表达、无细胞表达

T 细胞激活

义翘神州CAR-T开发解决方案

• CD3单克隆抗体：GMP-10977-H001

Effect of human CD3 (humanized OKT3) antibody on the proliferation and IFN-gamma secretion of CD4+ T cells.

• CD28单克隆抗体：GMP-11524-H001

Effect of human CD28 antibody on stimulating IL-2 secretion of CD4+ T cells co-activated with CD3 antibody.

慢病毒包装

义翘神州CAR-T开发解决方案

• 无血清细胞培养基及补料液

  SMM 293-CD1 培养基（货号：M293CD1）

相同条件下，使用SMM 293-CD1培养基，HEK293F细胞密度更好。

多款现货无血清、无动物源的HEK293培养基

货号	名称	应用
M293TII	SMM 293-TII培养基	新一代产品，HEK293细胞悬浮培养、蛋白瞬时表达、慢病毒包装
M293TI	SMM 293-TI培养基	原代产品，HEK293细胞悬浮培养、蛋白瞬时表达、慢病毒包装
M293-SUPI	SMS 293-SUPI加料液	支持悬浮类型细胞生长

• 细胞转染试剂

义翘神州拥有高品质的转染试剂 Sinofection® Transfection Reagent（Cat#: STF02），细胞毒性小、重复性高，可用于慢病毒载体的高效转染，转染效率基本可以达到95%以上

• GMP级核酸酶

义翘神州提供GMP级条件下生产的全能核酸酶Super Nuclease（Cat#: GMP-SSNP01），无动物源性，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。超高活性，应用场景广泛且使用量低不易残留，质量、性能、供货能力可靠，并已完成在FDA的药物主文件申报备案（DMF Number#:35978），满足药物申报的需求。

相同条件下，不同用量的GMP级全能核酸酶和其他品牌核酸酶对鲑鱼精DNA 的降解效率相当

• 细胞库检测

  义翘神州遵循NMPA、FDA、EMA、ICH等多个国内外法规和指导原则，建立了全面的细胞库测定方法，助力于CAR-T细胞治疗的安全性，主要包括以下几个检测方面：无菌检查、支原体检查、内外源病毒污染检查、成瘤性检查等。

• 慢病毒包装质粒生产

  义翘神州升级改造后的慢病毒质粒制备平台，采用GMP级别的生产线，对过程和最终产品的严格管控，确保了最终产品质量符合客户需求。义翘神州可以提供从μg级别，mg级别至g级别不同规模的科研级质粒生产服务，满足不同的需求。

CAR-T 细胞扩增

义翘神州CAR-T开发解决方案

更规范的GMP级质量管理体系、文件齐全的质量保证管理体系、更稳定质量控制体系、更安全的产品安全性检测体系：四大体系造就高品质GMP级细胞因子，保障CAR-T开发！

以GMP-IL21产品为例

高纯度：SDS-PAGE和SEC-HPLC高于95%

高批间一致性

高稳定性

GMP级别CAR-T培养专用细胞因子
货号	靶点	内毒素	纯度及活性
GMP-11848-HNAE	IL-2	< 0.005 EU/μg	≥95%，Active
GMP-11821-HNAE	IL-7	< 0.01 EU/μg	≥95%，Active
GMP-10360-HNAE	IL-15	< 0.01 EU/μg	≥95%，Active
GMP-10584-HNAE	IL-21	< 0.005 EU/μg	≥95%，Active

CAR-T 细胞质量控制

义翘神州CAR-T开发解决方案

• CAR-T细胞纯度检测

检测项目	检测目的	义翘神州解决方案
活细胞比例	检测活细胞比例	Annexin V/7-AAD凋亡检测试剂盒（Cat#: APK10448-F；Cat#: APK10448-P）
细胞群或亚群比例	监测CAR-T细胞的分化、耗竭、凋亡等	丰富的流式抗体产品
目的细胞比例	了解CAR-T细胞产品活性的关键特征	靶点蛋白、Protein L、抗独特型抗体制备服务
非目的细胞比例	检测残留的肿瘤细胞比例	涵盖CD19、CD20、CD22、EGFR、CD3等血液肿瘤和实体瘤热门靶点
杂质	检测细胞因子残留	IL-2 ELISA试剂盒（Cat#: KIT11848）、IL-7 ELISA试剂盒（Cat#: KIT11821）

• CAR-T细胞活性及功能性检测

  ELISA检测试剂盒

  过表达细胞株构建服务
  

• CAR-T细胞安全性检测

  无菌检查

  支原体检查

  细胞内源病毒因子检查

  外源病毒因子检查

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【参考资料】

[1] Nirali and T erry,  Mechanisms of resistance to CAR T cell therapy. Nature reviews | Clinical Oncology

[2] Sarwish, et al.  Engineering strategies to overcome the current roadblocks in CAR T cell therapy. Nature reviews | Clinical Oncology

[3] Rebecca and  Marcela, Recent advances and discoveries in the mechanisms and functions of CAR T cells. Nature reviews | Cancer