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养的细胞又双叒叕污染了|从入门到弃坑，

亲身经历了各种污染后我们含泪整理了这份

《细胞抢救指南》

当别人在做wb、上流式、测qpcr的时候

你的细胞污染了

当别人在整数据、写文章、投杂志的时候

你的细胞又污染了

当别人放假、答辩、毕业的时候

你的细胞又双叒叕污染了

    细胞污染——严重影响实验进度并导致科研工作者身心焦虑的原因之一

实在让人如鲠在喉如芒在背如坐针毡

Wuli慧慧子现身说法1🌻

有一段时间细胞间培养的细胞经常出现问题

各种黑点，细胞莫名挂掉

长着长着就停止生长...

一般来说污染的原因有三大类：细菌、真菌、支原体。

一、细菌污染

污染表现：上图是比较明显可以直接肉眼观察到的，细沙状的小黑点，培养基也容易出现浑浊不透亮的现象。根据污染的细菌种类的不同，所呈现的形态也各不一样，有球状、杆状等。检测的话目前一般都是取上清涂LB平板进行检测，2天后观察有没有菌落出现。

抢救方案：一般是直接丢弃，想要挽救的话可以尝试提高双抗浓度或者换用其他不同种类的抗生素进行压制，每次传代低速离心细胞，用PBS多次重悬离心细胞进行洗涤，尽量去除残余的细菌。一般传代3-5代之后，如果把抗生素去掉之后继续传了2-3代依然没有再爆发出来细菌污染，差不多就算是清除干净了。

二、真菌污染

污染表现：真菌污染早期一般难以发现，等发现时已经晚了，会出现或大或小的团块状的漂浮物，或者丝状、絮状的团块，明显有异与正常细胞，检测的话也是涂PDA平板进行检测。

抢救方案：处理的话如无必要建议直接丢弃，想要挽救的话可以尝试用各种抗真菌的抗生素进行压制，其他操作与细菌污染类似。

三、支原体污染

污染表现：一般来说，出现支原体污染的话，培养液出现浑浊或者基本没有变化，细胞生长速度正常或者生长缓慢基本不增殖或者没有原因的出现大面积死亡，用肉眼或者在显微镜下观察一般是不能直接判断出来是否存在支原体污染的。目前比较可信的还是直接用支原体PCR检测试剂盒进行检测。

抢救方法：清除的话支原体去除剂许多公司都有卖的，但是一般都很难处理干净，加的浓度低了没有效果，浓度高了影响细胞正常形态的事情也经常发生，周期也很长，而且即使处理干净了可能细胞株已经发生了未知的改变，不再表达原来的某些基因或者蛋白了，影响后续的实验。所以如无必要，不建议挽救。

宝藏男孩东哥现身说法2🌻

曾经踩过的坑？

盲目相信细胞供货商提供的细胞是正常的，直到后来开始检测支原体之后才发现，有许多细胞买回来就是有支原体污染的，咨询售后也会被告知国内60%以上的细胞都是有支原体污染的，他们许多也是自己用各种支原体去除剂处理2-4周之后检测没有问题了再当成正常细胞来销售的，还趁机被推销了一波他们的支原体去除剂之类的产品。

为什么要弃坑？

需要浪费大量时间、精力、试剂、耗材去处理各种污染的细胞，处理一株污染的细胞周期很长，还不一定能处理干净，得到想要的结果，而且即使处理干净了以后可能过一段时间细菌真菌产生耐药性或者支原体又重新爆发了，基本上就很难再压制下去了。

如何弃坑？

源头上杜绝污染：收到新订购的细胞之后一般培养2天之后就要取上清液进行细菌、真菌涂平板检测和支原体PCR检测，发现有问题的及时跟售后联系，或者换一家其他渠道的细胞继续检测。

过程中杜绝污染：平时处理细胞的话尽量选用一次性耗材，枪头尽量使用带滤芯的，因为移液枪不注意的话经常会有倒吸的情况发生，用枪注意慢吸快打；同一时期有大量细胞出现细菌真菌污染的情况发生的话，试剂耗材这些都需要逐一排查，培养环境也需要彻底清理消毒。

当然如果你还是解锁不了上述技能、还是无可挽回的让细胞挂掉了也没关系，科科已经帮你养好了一大批健康的细胞

活动时间：2020年12月8日-2021年1月8日

活动内容：指南针生物板块周年庆来袭，细胞平台来献礼了！！！

凡即日起至2021年1月8日，在科学指南针平台预约细胞相关试验，均可免费使用我司现有细胞株（需同时使用多种细胞株可免一株费用） 

可参与活动的细胞株如下👇

细胞名称（中文）	细胞名称（英文）	来源
人宫颈癌细胞	Hela	人
小鼠胚胎成纤维细胞	NIH3T3	小鼠
小鼠胚胎成骨细胞前体细胞	MC3T3-E1	小鼠
正常肝细胞	LO2(HL-7702)	人
大鼠肾小管导管上皮细胞	NRK-52E	大鼠
人乳腺癌细胞	MCF-7	人
肺癌细胞	A549	人
巨噬细胞	RAW264.7	小鼠
永生化纤维细胞	HACAT	人
成骨瘤细胞	MG63	人
小鼠小胶质细胞	BV2	鼠
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞	PC12	大鼠
小鼠乳腺癌细胞	4T1	小鼠
仓鼠卵巢细胞	CHO	仓鼠

为了感谢您这一年的支持和肯定~科科统计了这一年的项目数据，挑选出高频高热度的几株细胞，相信总有一个是你需要的。

为啥细胞都能免费，还不是因为我们的技术老师把细胞养得妥妥的，就俩字靠谱！！！

OMG，盘他！

END

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