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都说灭菌大法好,没法高温高压灭菌的样品到底怎么处理?

​西风是爱 生物实验菌 2022-07-09

灭菌与消毒是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术,但是二者却有本质的区别。消毒是利用化学或物理方法,杀死大部份致病微生物的过程。而灭菌是以化学剂或物理方法消灭所有微生物,包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒,而达到完全无菌之过程。


工欲善其事,必先利其器。在生物实验中,灭菌是实验结果的基本保障。从大的方面来讲,灭菌方法可分为物理方法和化学方法。物理方法有加热、过滤、辐射;化学方法是采用化学试剂抑制或杀灭微生物,主要破坏细菌代谢机能,如重金属离子,磺胺类药物及抗生素等。

一、加热法


1、干热法:火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。
火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等,试管口和瓶口,涂布用玻璃棒。

 
热空气灭菌利用高温干燥空气(160-170℃)加热灭菌1-2 h,适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性,与水的含量有关,当环境和细胞含水量越大,凝固越快。

 
注意事项:培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法;温度控制在<180°;物品不能太挤;温度降至70°时才开箱门。
2、湿热法:原理—因为湿热中菌体吸水,蛋白质容易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低;湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。

 
高压蒸汽灭菌,时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌,也可用于玻璃器皿的灭菌。
常压蒸汽灭菌,对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基,含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。
煮沸灭菌法,适用注射器和解剖器皿,时间10-15min。
超高温杀菌,135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品。优点:保持食品价值和营养成分。

二、过滤除菌


原理:介质在有压力时阻隔微生物。适用于许多材料如血清、抗生素及糖溶液。

 
优缺点:不破坏培养基成分,只适用少量滤液。需大量无菌空气以及净化工作台。
注意事项:压力适当;无菌条件下进行;防止渗透现象

三、辐射灭菌


原理:紫外线波长在200-300 nm,具有杀菌作用,以265-266 nm杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收;可产生臭氧和过氧化氢,杀菌效力与强度和时间的乘积成正比

 
缺点:穿透力不大。距照射物<1.2 m为宜。
注意事项:对眼睛和皮肤有刺激作用。

四、化学药品灭菌


原理:应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂如重金属离子;抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。

 
注意:与药品的浓度高低,时间长短,微生物种类以及微生物所处的环境有关。
常用化学杀菌剂有:乙醇、醋酸、石碳酸、福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等。

 




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