细胞周期检测的流程

细胞周期一般有几种检测方法，如流式检测法、BrdU(5~溴脱氧尿嘧啶核苷)掺入法及同位素标记法等，尤其是其中的流式检测法可适用于大量样品的细胞周期检测，能急速的分析单个细胞的多种特性，它是现在最经常用到的测定细胞周期的一种很有效的方法，以下就其中的流式细胞仪来进行周期分析和测试。

一、流式检测的实验原理

1、由于细胞周期各时相的DNA含量不同，因此，可通过特异性与DNA结合染料来检测细胞内的DNA含量来测定细胞周期。

2、流式中常用碘化丙啶(Propidium，简称PI)与DNA结合，其荧光强度与DNA含量成正比。

二、流式细胞仪的实验步骤

1、收集细胞 取适量的对数生长期细胞接种于6cm中，在相应的条件下（如药物）处理相应时间后，倒去培养基，用胰酶适度消化细胞，离心收集细胞，弃去上清。

2、清洗及固定细胞 用PBS清洗细胞2遍，吸净离心管残余的PBS后，加入300μL PBS重悬。

3、洗涤细胞 次日，离心收集细胞，用移液枪吸走上清，然后用1mL PBS重悬细胞并离心清洗2~3遍。

4、RNA酶消化和PI染色 在避光条件下，每个样品加入1避光 RNase （10mg/mL）和5和mg/m（5mg/mL）混匀后室温避光条孵育30min。

5、上机检测 将检测样品转移到5mL的流式管后用流式细胞仪检测细胞周期，采用flowjo或modifit软件进行DNA含量分析。