临床研究案例：非小细胞肺癌免疫细胞干预后6个月，原发肿瘤的大小减小了近一半。

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导语 / Introduction

长期以来，免疫细胞疗法备受关注，在一些发达国家已经取得了积极的临床结果。该疗法是通过从患者的外周血中分离免疫细胞，然后在特定培养基中培养，以扩增一个或多个种类的细胞数量，最后将这些扩增的细胞全部输注回患者体内。NK细胞在肿瘤免疫监视中发挥着至关重要的作用，已被证实能够在无需事先致敏的情况下摧毁异常细胞或癌细胞。

      

NK细胞能够根据细胞表面主要组织相容性复合物（MHC）I类的异常表达水平，区分体内正常细胞和异常细胞。NK细胞通过释放导致细胞凋亡的穿孔素和颗粒酶、与死亡受体配对以及分泌不同效应物质等多种机制来杀死癌细胞。

在目前对NK细胞生物学和功能的认识下，NK细胞已经成为癌症免疫治疗中的有效工具。特别是，那些在一线治疗或维持治疗中失败的癌症患者，在与其他方法联合应用免疫疗法后，取得了良好的反应。

非小细胞肺癌（NSCLC）是最常见的肺癌类型之一，是全球主要死亡原因之一，2022年12月，《Respir Med Case Rep》杂志上发表了一份关于NSCLC（非小细胞肺癌）复发后应用免疫细胞治疗的病例报告。结果显示，患者在临床症状和生活质量方面都取得了良好的反应。治疗后6个月，原发肿瘤的大小减小了近一半！

案例报告

2019年5月，一名60岁的男性患者，无吸烟史，出现咳嗽、背痛和疲劳症状，被诊断为非小细胞肺癌（NSCLC）。CT显示左肺上叶有一个主要肿瘤，大小为25×31毫米，侵犯纵隔组织，紧邻主动脉（图1A）。纵隔中可见数个淋巴结，最大的尺寸为5×15毫米，而右肺上叶显示两个分别为5毫米和7毫米的淋巴结。

通过CT引导下经皮穿刺活检的结节和腺癌组织经病理学检查确认（PHE）。病理分期为T4N2M1a（第四期）。肿瘤标志物CA125轻微增高（55U/ml），CA199和CEA均在正常范围内。分子分析显示EGFR无突变。由于病变较大且侵犯纵隔，无法进行手术治疗。

图1. 初次诊断时的主要肿瘤CT扫描检查（A）。在第一线治疗后（卡铂650毫克（AUC5）加上紫杉醇300毫克（175毫克/平方米），与放疗联合治疗，共3个周期），主要肿瘤PET/CT扫描检查（B）。

从2019年6月到2019年12月，患者接受了首次治疗，即卡铂650毫克（AUC5）加上紫杉醇300毫克（175毫克/平方米），第三个周期联合放疗。他出现了部分缓解，临床和辅助检查症状都有所改善。患者的正电子发射断层扫描（PET）/CT显示主要肿瘤大小减小至12×7毫米（图1B），肿瘤标志物值在2019年12月恢复正常。

然而，疾病在2020年5月出现了局部进展。PET/CT扫描显示主要肿瘤大小为28×29毫米（图2A），最大标准摄取值（SUVmax）为11.2，与纵隔胸膜和主动脉粘连。此外，左锁骨上淋巴结出现大小为9×6毫米（图2B），左肺门还有几个直径小于10毫米的小淋巴结。

图2. 在首次治疗一年后疾病出现进展：主要肿瘤（A），左锁骨上淋巴结（B）。

患者显示出阳性的PD-L1表达（25%），被建议接受第二线治疗，包括4个周期的艾美单（500毫克x2）、卡铂（150毫克x2，450毫克x1）和凯特鲁达（4毫升x2）。然而，患者的病情在2020年9月PET/CT扫描随访中发现进展。主要肿瘤增大至26×35毫米（SUVmax：22.6）（图3A）。此外，还出现了新的病变，如右锁骨上淋巴结、前纵隔和气管旁的淋巴结，以及两侧肺门区的少数淋巴结。由于病情进展，患者的治疗方案发生了变化。2020年10月，患者被住院进行自体NK细胞输注，共接受6次输注，与吉西他滨/阿瓦斯汀联合治疗。入院时，患者无发热，脉搏为每分钟79次，血压为110/70毫米汞柱。他经历了干咳和左胸闷痛。辅助检查结果包括血液学和血液生化均正常，除了白细胞计数偏低（2.81 G/L，低于正常水平）。

图3. 联合治疗前后的主要肿瘤情况。二线治疗（4个周期的艾美单、卡铂、凯特鲁达）后，主要肿瘤进展（A）。在自体NK细胞治疗、吉西他滨和贝伐单抗联合治疗结束时，主要肿瘤缩小（B），3个月后（C），6个月后（D）。

自体NK细胞免疫治疗：患者接受了外周静脉抽取20毫升的血液，并使用Ficoll密度梯度离心法提取免疫细胞。然后，在添加了适当浓度的IL-2、IL-12和IL-18的AIM-V培养基（治疗级别- Thermo Fisher）中培养、激活和增殖免疫细胞。培养21天后，细胞被收集、计数，并通过Novocyte流式细胞术仪（ACEA Biosciences, Inc）分析所得细胞块的表型。

根据表面标记物可以确定每种类型的免疫细胞比例，有助于评估培养后的细胞：淋巴细胞（CD45⁺）、B淋巴细胞（CD45⁺CD19⁺）、T淋巴细胞（CD45⁺CD3⁺CD16⁺CD56⁻）、NK细胞（CD45⁺CD3⁻CD16⁺CD56⁺）、NKT细胞（CD45⁺CD3⁺CD16⁺CD56⁺）。通过培养基的细菌学检查、支原体检测和内毒素检测对所得细胞块进行安全评估。在活跃增殖培养21天后，所得细胞数达到5×10⁸个活细胞以上，其中NK细胞的百分比超过60%，所有细胞样本在培养后的细胞块中均不存在细菌、支原体和内毒素，因此是安全的。NK细胞收集后，将通过静脉输注返回患者体内。

患者在4.5个月内接受了6次自体NK细胞块输注疗程，每3周一次（图4）。在此期间，他还接受了吉西他滨（1800毫克）和贝伐单抗（400毫克）的联合治疗，每3周1次（连续2个周期）。联合治疗4.5个月后的结果：干咳和胸痛症状消失，患者食欲好转，生活质量显著改善（图5）。在使用联合治疗期间未观察到明显的副作用，肝功能和肾功能评估均在正常范围内（图6）。2021年3月和2021年9月进行的PET/CT扫描显示，与联合治疗前相比，主要肿瘤的大小显著减小（图3B、3D），此外，纵隔和双侧锁骨上淋巴结在此期间未见。

图4. NK细胞治疗的免疫表型监测。患者从2020年10月开始接受细胞治疗。患者接受了6个治疗疗程（每个疗程1次输注）的NK细胞治疗，治疗持续了4.5个月。每隔3周进行1次输注，共6次输注。

图5. 治疗前后患者生活质量的评估。A. 生活质量：患者整体情况较之前更好，症状明显减轻。B. 功能症状：经过6次输注后，患者的疼痛和咳嗽明显减轻。

图6. 血液生化检查。大多数生化指标：CEA、AST、肌酐在NK细胞治疗前后保持在正常水平。红细胞、白细胞和血小板在治疗期间有时略低于正常水平。A. CEA、B. AST、C. 肌酐、D. 红细胞、E. 白细胞、F. 血小板。

结论

在过去几十年中，免疫学领域取得了显著进展，免疫疗法在癌症治疗中的应用也在不断推进。在新兴的新治疗方法中，NK细胞疗法被视为普遍癌症治疗特别是肺癌治疗的有望候选者之一。许多研究阐明了NK细胞在支持整个免疫系统中的重要作用，以及NK细胞与人体多种疾病的关系。大多数NK细胞在表面上表达CD16（FcγRIII）标记物，能够结合到IgG1、IgG3的Fc区域，并导致ADCC（抗体依赖性细胞毒作用）。因此，当NK细胞被输注到患者体内时，它们发挥着极其重要的作用，不仅通过抗体引起靶细胞毒性，而且还能够动员其他免疫细胞一起参与对癌症治疗的应答。

最值得注意的是，最近的研究表明NK细胞可以识别和摧毁癌症干细胞。这尤其重要，因为采用NK细胞的疗法可以抑制癌细胞的增殖，从而降低复发和转移的风险。根据其它团队的研究，PD-L1（+）的晚期NSCLC患者接受帕博利珠单抗加NK细胞的生存期比仅接受帕博利珠单抗的患者更长。此外，接受多次NK细胞输注的患者组的OS比接受单次NK细胞输注的患者组更好。此外，对于EGFR突变的晚期肺腺癌，NK细胞治疗组的血清CEA和CA125水平低于非NK治疗组，而接受NK细胞的组的缓解率显著高于对照组 。

作者：摩西| 编辑：暖风

References

[1] Nguyen TMT, Van Tran K, Ta VT, Tran LM, Tran CK, Trinh HL, Ta DT, Nguyen BT, Tran TH. A case of response to combination treatment with autologous immunotherapy and bevacizumab in advanced non-small cell lung cancer. Respir Med Case Rep. 2022 Dec 29;42:101804. doi: 10.1016/j.rmcr.2022.101804. PMID: 36845645; PMCID: PMC9945779.

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