基于 AuNPs 和 GQDs 的新型电化学纳米免疫传感器 | MDPI Nanomaterials
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引言
心血管疾病的发病率及其造成的死亡比例非常高,并且具有血压、血液胆固醇和葡萄糖水平升高以及诱发性肥胖等明显的伴随症状。初期诊断作为该疾病的有效应对手段,其相关的策略得到了医学界的广泛关注。来自德国柏林工业大学的 Zeynep Altintas 教授团队在 Nanomaterials 发表了文章,研究采用石墨烯量子点 (Graphene Quantum Dots, GQDs) 和金纳米颗粒 (Gold Nanoparticles, AuNPs) 修饰的用于超灵敏无酶电化学纳米免疫传感器的丝网印刷金电极 (Screen-Printed Gold Electrode, SPGE),该传感器可用于心肌梗死 (Acute Myocardial Infarction, AMI) 的早期诊断。研究还采用方波伏安法 (Square-Wave Voltammetry, SWV)、循环伏安法 (Cyclic Voltammetry, CV)、电子阻抗谱 (Electron Impedance Spectroscopy, EIS) 和原子力显微镜 (Atomic Force Microscopy, AFM) 测试分析了传感器制造过程中的特性变化,并利用透射电镜 (Transmission Electron Microscopy, TEM) 和扫描电镜 (Scanning Electron Microscopy, SEM) 对 AuNPs、GQDs 及其纳米复合材料进行了表征。
图 1. 具有 AuNPs 和 GQDs 丝网印刷金电极 (SPGE) 的新型电化学纳米免疫传感器制造步骤。
研究材料与方法
为了更便捷的测定 cTnI 生物标志物,作者团队设计了纳米复合材料修饰的无酶电化学纳米免疫传感器 (图 1)。实验首先研究了优化纳米复合材料和用于安培分析的 H2O2 浓度、纳米复合材料在 SPGE 表面的植入策略,以及抗 cTnI (cTnI-抗体) 浓度等多个参数,并且测量和比较了裸 SPGE 和纳米复合材料功能化 SPGE 所提供的安培响应。研究还利用 SEM 和 TEM 对 AuNPs、GQDs 及其纳米复合材料进行了分析。AuNPs 和 GQDs 分别被用作纳米酶和信号放大剂,以取代酶系统以及提高设计的抗体传感器的灵敏度,为了研究其信号—浓度关系,还利用安培法在纳米复合材料涂层的 SPGE 表面进行 200 秒的测量,并对 H2O2 浓度进行了优化,研究了 H2O2 孵育时间的影响;将纳米复合材料滴涂在 SPGE 表面后,通过 EDC-NHS 耦合化学活化 GQDs 的官能团。
研究利用原子力显微镜对 SPGE 的逐步制备进行了表征;抗体固定后,在进行生物标志物检测之前,将 SPGE 与 100µg mL−1 BSA (在双蒸馏水中制备) 孵育 1 分钟,以阻断 SPGE 上的无抗体区域,并避免免疫反应期间可能的非特异性相互作用。此外还通过测试参考生物分子 (包括 NSE、D-(+)-葡萄糖、BSA、转铁蛋白和多巴胺) 可能的交叉反应,研究了所开发的纳米免疫传感器的特异性。研究还在氧化还原标记溶液存在的 SWV 法进行电化学测量,并研究了人血清中 cTnI 的电化学检测,研究结果表明:制备的纳米免疫传感器具有广阔的临床应用潜力。
研究结果
AuNPs 和 GQDs 及其纳米复合材料表征
AuNPs 的 TEM 和 SEM 表征结果表明:其球形纳米颗粒的平均直径为 4.7±2 nm,并且 XRD 结果证明了内部合成的 AuNPs 具有晶体特征。GQDs 的 TEM 表征结果显示:其颗粒的大小约为 8~10 nm,并且尺寸和形貌均匀,EDX 光谱还显示了其元素组成。如图 2 所示,纳米复合材料的 TEM 测试结果显示了其均匀的尺寸分布;其 SEM 研究结果显示,AuNPs 以黑色颗粒状颗粒的形式出现,大小分布均匀,而 GQDs 以岛状形式出现;EDX 结果还显示了纳米复合材料混合物中由于前驱体导致的无机盐存在。
图 2. AuNPs@GQDs 在 (A) 20 nm 和 (B) 5 nm 尺度的 TEM 图像;AuNPs@GQDs/SPGE在 (C) 1 μm 和 (D) 100 nm 尺度的 SEM 图像;GQDs@AuNPs/ 硅片在 (E) 1 μm和 (F) 100 nm 尺度的 SEM 图像;(G) AuNPs@GQDs 的 EDX 光谱。
最佳纳米复合材料和 H2O2 浓度的测定
本文分别将 GQDs 和 AuNPs 作为纳米酶和信号放大剂,以取代酶系统并提高纳米免疫传感器的灵敏度。作者团队分别将两种不同浓度的 GQDs 和 AuNPs 结合并进行测试,以获取其信号—浓度关系;此外还使用了三种不同浓度的 H2O2 (2.5 mM、5.0 mM 和 10 mM) 对上述纳米复合材料浓度的所有可能组合进行了安培测量。为了研究在 SPGE 表面添加 10 mM H2O2 后安培测量时间的重要性,研究还进行了下一步的实验。在表面用 H2O2 对优化浓度的纳米复合材料孵育 5 分钟后进行安培测量,并在裸 SPGE 表面上进行了安培分析。
SPGE 上植入 AuNPs@GQDs 的方法及抗体固定化
研究还对比了三种纳米复合材料植入 SPGE 的策略,包括:利用多步安培法实现 AuNPs@GQDs 电沉积、在多巴胺存在下利用多步安培法实现 AuNPs@GQDs 电沉积、在室温下对 AuNPs@GQDs 进行滴涂。通过对比研究,最终采用了滴涂方法来制造传感器以及进行生物检测。研究了还对比了三种不同浓度的 cTnI 抗体 (10 µg mL−1、25 µg mL−1 和 50 µg mL−1) 用作生物测定的效果,其结果表明 25 µg mL−1 为最佳抗体浓度。
传感器制造与表征
研究详细介绍了 AuNPs@GQDs 电化学免疫传感器的制造过程,具体流程如图 1 所示。实验过程中采用了 SWV 和 EIS 技术对每个传感器制造步骤进行表征 (图 3),包括 SPGE 的等离子清洗、AuNPs@GQDs 在 SPGE 上的滴涂、AuNPs@GQDs/SPGE 上的抗体固定,以及孵育 10 分钟后将 cTnI 结合到抗体/AuNPs@GQDs/SPGE 表面等。如图 3 所示,滴镀 AuNPs@GQDs 后 SWV 曲线峰值电流明显增大,说明纳米复合材料成功植入 SPGE 表面。在 SPGE 表面沉积纳米复合材料后,产生的信号放大是由于表面积的增加,这将为抗体固定提供一个大的自由空间。随后,在 AuNPs@GQDs/SPGE 表面孵育抗体后,传感器信号明显下降,证实抗体成功固定在 AuNPs@GQDs/SPGE 表面。将 100 pg mL−1 cTnI 结合到抗体/AuNPs@GQDs/SPGE 表面后,SWV 峰值进一步降低,表明通过免疫反应存在 cTnI 抗原。此外,在 CV 的情况下也观察到类似的趋势。
图 3. 电化学免疫传感器的制造过程中的方波伏安、信号响应 EIS 以及 AFM 表征结果。
研究还采用 SWV、CV、EIS 和安培法对 cTnI 进行了测定,并采用研发的电化学抗体传感器,针对以 cTnI 为目标分析物的人转铁蛋白、NSE、多巴胺、BSA 和葡萄糖等非特异性分子进行研究。此外,为了实现设计的 AuNPs@GQDs 电化学免疫传感器的临床适用性,还研究了其在人血清中的性能,其中使用 SWV、CV 和安培法在 10 至 1000 pg mL−1 的线性浓度范围内测定了 cTnI。
总结讨论
研究开发了一种基于 AuNPs 和 GQDs 的新型电化学纳米免疫传感器,该传感器可以使用 SWV、CV、EIS 和安培测量等技术,以高灵敏度检测 cTnI 生物标志物。在传感器的制备过程中,作者团队还采用 TEM、SEM、XRD 和 AFM 等方法对 AuNPs、GQDs 及其纳米复合材料的形貌,采用 SWV、CV、EIS 等方法对不同制备步骤的免疫传感器进行了表征。研究结果证明了基于 AuNPs 和 GQDs 的新型电化学纳米免疫传感器在 AMI 现场检测中具有广阔的应用前景。
原文出自 Nanomaterials 期刊
Mansuriya, B.D.; Altintas, Z. Enzyme-Free Electrochemical Nano-Immunosensor Based on Graphene Quantum Dots and Gold Nanoparticles for Cardiac Biomarker Determination. Nanomaterials 2021, 11, 578.
Nanomaterials 期刊介绍
主编:
Shirley Chiang, University of California Davis, USA
期刊主题涵盖纳米材料 (纳米粒子、薄膜、涂层、有机/无机纳米复合材料、量子点、石墨烯、碳纳米管等)、纳米技术 (合成、表征、模拟等) 以及纳米材料在各个领域的应用 (生物医药、能源、环境、电子信息等) 等。
2021 Impact Factor | 5.719 |
2022 CiteScore | 7.4 |
Time to First Decision | 12.7 Days |
Time to Publication | 33 Days |
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特约撰稿人
赖寿强 博士研究生
厦门大学
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