研发实验室超标超常数据分析管理应用方法探讨
研发实验室超标超常数据分析管理
应用方法探讨
摘要: 质量控制实验室的管理，在国内外药品生产质量管理规范 (GMP)中均进行了规定，尽管其中存在一些差异，但总体原则与要求是基本一致的。在美国药典及《中华人民共和国药典》等主要的药典中也针对质量控制实验室的管理要求制定了指导原则。实验室检验和00S/OOT结果调查息息相关,通过加强OOS/OOT结果调查,可以明确实验室检验当中的相关问题，提升药品质量控制和管理效率。本文简要阐述了药品检测实验室OOS/OOT处理过程注意事项，进一步探究了药品研发实验室质量控制策略，从而保证实验室检验检测工作科学、公正、有效，以真实可靠的数据独立的评价产品质量[1-2]。
关键词：实验室检验；质量控制；结果调查；根本原因；纠正预防
引言
实际的药品质量控制应遵循最新的GMP规定。为了保证实验操作规范性和结果准确性,通常采用的措施是加强实验室检验结果的专业检验和结果调查。针对实验室检验的所有超标结果,应逐一的、严格的按照相关标准进行调查,调查的同时需进行相关记录，其中应特别重视结果偏差调查的相关记录，00S/OOT结果调查方法在实验室检验结果调查当中应用广泛。本文主要介绍00S/OOT概念以及00S/OOT结果调查原因分析及纠正预防措施。
随着“质量源于设计”的质量管理理念的普及，以及《药品生产质量管理规范》2010年修订版的逐步深入推行，药品行业对研发实验室发生的检验超标超常结果（以下称“OOS”），要求进行完整的调查。若在未找到根本原因或充分论据证实的情况下，直接以复测结果取代初始结果，检验结果的可靠性和实验室检验检测能力都将饱受质疑。
历年以来，FDA官网发出的警告信中提到的OOS调查相关缺陷有以下类型：
未能如实记录OOS结果；
OOS原因未进行证实，仅通过复测代替原结果；
滥用假设检验/离群值检验判定OOS结果无效；
频繁将OOS归因为人为因素；
将OOS结果归因为人员不遵守SOP，但是未调查人员为什么不遵守SOP；
频繁判定OOS结果无效，但是没有充分的调查说明潜在的生产原因；
OOS归因后，评估不充分；
大量OOS调查长时间未关闭；
OOS制定的纠正预防措施长期未得到执行。
检验超标超常结果处理程序非常麻烦，至今没有统一的流程，2006年FDA发布的《00S处理程序指南》也只是规定了注意要点。因此药品研发实验室需要建立实验室OOS调查流程，保证调查过程的科学性、合理性和全面性，最大程度的减少因实验室错误造成的检验异常。
1 00S/00T概念介绍
00S（Out of Sepcification）对应的GMP中的解释叫做检验结果超标，根据GMP的定义，是指检验结果超出法定标准及企业制定标准的所有情形。以下情况同样视为超标：检验两份样品，若其中一份样品检测达标而另一份样品未达标；检测结果严禁进行平均，应视为超标。
00T（Out of Trend）属于偏离趋势的结果，但结果符合规定，在GMP中没有明确的定义，但是GMP的正文中持续稳定性考察章节要求“应当对不符合质量标准的结果或重要的异常趋势进行调查”，说的其实也就是对于超出趋势的调查。有关规定和标准要求对应的实验室检验结果需实时满足要求，但随着时间的推移，会出现实验室检验结果超出原本的结果要求，当产品稳定性变化后，就会导致超预期结果问题出现[3]。
通过00S/OOT结果调查分析，应力求识别事件根本原因，无法识别根本原因的，应尽可能识别直接原因，并基于直接原因分析可能的根本原因（通常多个）。当因00S检验结果的出现而导致产品被否定，需要对00S/OOT结果调查进行加强分析，目的是确定超标结果是否和其他产品之间有某种关系，并对相关工作做好应有的准备。
2 实验室检验与OOS/OOT结果调查分析
一般来讲，OOT的限度往往是基于对产品特性的理解，根据稳定性数据或者根据大量的历史批次数据的回顾做出的。相关公司应从产品性质和内部情况两方面进行考虑，在此基础上制定出符合自身的OOT标准要求，并根据产品情况的变化，及时对OOT 标准进行修订和完善。
当超标结果调查[4-5]明确之后，相关负责的实验人员应及时报告，随后专业QC管理人员根据报告情况加强对调查结果的评价，确定出超标结果产生的具体原因，同时加强00S/OOT结果调查分析。00S/OOT结果调查分析在实际工作中主要分两阶段进行。
第一阶段初步调查阶段：
00S/OOT结果调查分析在第一阶段,应当确定00S/OOT结果产生的根本原因，或者是具体原因。
（1） 调查要遵循实事求是的原则：
首先在实验室内部展开。该阶段主要是为发现明显的实验室错误。
（2） 计算过程调查：
确认使用的质量标准为现行版本；
确认原始数据计算方法的科学合理性、恰当性、准确性；
重新进行计算，以确定是否为计算错误；
确认有效数字的取舍是否正确。
（3） 仪器参数设置调查：
通过查看仪器方法、设备参数、审计追踪等，确认使用的仪器方法、参数与规定是否一致。
（4） 仪器设备调查：
检验设备或仪器及玻璃容器是否经过计量或者验证，并确认是否在检定或校准的有效期内。
通过查看仪器使用日志、仪器设备状态等方式确认仪器使用过程中状态是否正常，并确认是否是由于该原因引起的结果异常。
（5） 物料信息调查：
检查对照品，主要是试剂试液和其他用到的溶液，检查内容主要是对照品有效期和制备过程的准确性，对照品的物料信息应满足质量控制的要求并在有效期内，其制备过程应正确。
检查原始样品，包括外观，标签及包装，存储条件等。
（6） 分析过程的调查：
检查样品和对照品的制备的正确性；
检查玻璃容器中剩余溶液的性状和体积，并检查所用的容器是否使用正确并无可见的污染；
复核文件及原始记录，确认实验是在现行版本的实验方法规定的条件下进行的，实验过程及方法正确；
色谱和光谱等原始数据无异常或者可疑的信息。
（7） 检验环境的调查：
断电等外部条件的调查，也包括实验室环境是否符合规定要求，如温度、湿度的控制等。
（8） 原液重新进样：
本阶段可以通过对原液（原进样小瓶或原容量瓶）重新进样，验证初次的检验结果，进而识别进样过程的异常情况。
（9） 其他明显的操作错误：
明显的操作错误如样品溶液泄露，样品转移时操作不规范导致的转移不完全等。
初步调查结束后应形成初步结论，包括是否识别到根本原因，如未识别，应提供进一步的调查建议。若识别到根本原因，则原结果无效。实验人员对样品进行复测，复测结果合格时，复测结果作为最终结果，并形成00S/OOT调查报告，针对找到的原因制定纠正预防措施。
（10） 若未找到根本原因或者复测结果仍不合格时进入扩大调查。
第二阶段扩大调查阶段：
进入扩大调查的同时，由QA组织调查小组根据初步调查结果和事件的情况综合分析。
本阶段调查的主要目的是通过测试确定造成异常结果的根本原因。
（1）假设测试
实验室针对初步调查结果及问题出现的可能原因，优先考虑设计合理的测试方案，由QA确认后发起测试。假设测试可以采用针对假设原因采取原液测试、原样测试、临时性模拟验证实验、取已知结果的同类产品对比测试、增加加标回收等质控手段等。
（2）复测
若经过假设测试，根本原因得到证实，实验人员对样品进行复测，复测结果合格时，复测结果作为最终结果，并形成OOS调查报告，针对找到的原因制定纠正预防措施。复测结果不合格时，需重新取样平行复测。
（3）重新复测
若经过假设测试，仍然没有找到根本原因，应另外安排两名实验人员（检验能力高于初检人员）对样品进行复测。
两人复测结果与初检结果一致，则确认OOS结果；两人复测结果与初检结果不一致时，应该考虑是否样品本身的问题。
（4）重新取样平行复测
对取样过程进行调查，包括取样环境，取样方法，取样工具和取样人员的操作过程等，以确定导致异常结果的原始样品是否具有代表性。
若调查确认取样环节存在问题或剩余原液量已经不能满足复验需求或已无代表性，需要重新取样按照原有检验程序进行复测。用于重新取样复测的样品，与导致异常结果的原始样品应该为同批次的均匀产品。液体样品，应该来源于最初的同一容器的液体产品，或者液体产品的混合物；固体产品应该为同一批混合物的另外称重。
如果通过评估表明最初的00S/00T结果无效,应出具相关产品的合格报告并实施记录归档操作[6]。如果在进行00S/00T结果调查后发现，原因是产品存在质量,此时应对问题进行深入挖掘,若问题不是由实验室操作导致的话,应及时启动CAPA,进行深入调查分析[7]。此阶段应启动有效的预防措施,防范后期实验室检验差错问题的出现。对检验结果超标问题这一情况,一旦确认超标,应及时告知QA，然后相关人员对各个环节问题应逐一的按照相关的标准和规范进行处置，同时应对结果调查范围进行扩大，找出超标问题产生的根本原因[8]。
三、研发实验室超标超常数据统计分析
对全年研发实验室在无机元素检测项目中发生的OOS进行数据统计分析，发现发生频率较高、影响较大的原因是制备耗材污染，对此进行重点研究。
1.确定污染来源
通过对34份调查报告进行统计分析，发现污染来源主要集中在进样管、容量瓶、消解罐。进样管、容量瓶用于溶解、稀释、制备、盛放上机溶液，溶剂主要为2%-5%的硝酸溶液。消解罐用于含有机物质的样品前处理，溶剂主要为硝酸。
2. 污染源改善的研究
仪器：电感耦合等离子体质谱仪7900（安捷伦科技有限公司），微波消解仪SH150-1000（北京莱伯泰科仪器股份有限公司），酸缸
试药：镍元素标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心，规格：1000μg/ml，50ml，批号：213025-2）
（1）对不同品牌的进样管和容量瓶、对进样管和容量瓶的清洗程序进行质量研究：配制一定浓度的镍标准品溶液进行测试，将浓度测试结果C与实际浓度C0进行对比，回收率(C/C0)超出90%-110%视为超标结果。
（2）对消解罐使用时间和清洗程序进行质量研究：配制一定浓度的标准品溶液进行测试，将浓度测试结果C与实际浓度C0进行对比，回收率(C/C0)超出90%-110%视为超标结果。
通过以上质量研究结果分析，试验过程中选择进口品牌（如安捷伦）的进样管，容量瓶清洗程序中增加一定浓度的酸液浸泡，消解罐清洗程序中增加空罐运行一次消解程序，能够降低无机元素检测项目中超标超常数据的发生概率。
3.综述
通过建立实验室超标超常结果的调查流程，找到造成超标超常结果的根本原因，并通过数据统计分析，对无机元素检测项目中发生频率较高、影响较大的制备耗材污染进行重点研究，优化了试验过程管控方法，选择进口品牌（如安捷伦）的进样管，容量瓶清洗程序中增加一定浓度的酸液浸泡，消解罐清洗程序中增加空罐运行一次消解程序，能够降低超标超常数据的发生概率，从而提高实验室检验检测能力。
四、结语
质量管理人员处置检查结果超常问题时，应严格落实界警戒限设置工作，常采用的做法是结合以往数据确定好警戒限来加强对00T结果的评估。一旦结果出现异常但未超出设置好的警戒线，此时应做好实验室调查分析，在确认实验室调查无效后，应进行下一步的检测分析，获知实验数据的实际发展趋向,若实验结果在趋势内的话，停止调查，如果00T出现频率频繁，应从实验室环节情况和生产工艺情况两方面入手进行调查。
综上所述，本文主要探讨了实验室检验内容和00S/00T结果调查内容，明确实验室检验过程中可能出现的一系列问题，能够在整体上获得较高的实验成功率，使得产品检测完成时间大为减少。
参考文献:
[1]王澜.实验室检验与00S/00T结果的调查[J].机电信息,2013,12(11):15-17,30
[2]于泳.浅谈药品生产00S调查的实施[J].机电信息,2013,20(17):16-22.
[3]高海燕,丁恩峰,陈军丽等.国际注册中微生物相关MDD调查探讨[J].医药工程设计,2011,32(1):29-31.
[4] FDA．Investigating out-of-specification(OOS) test results for pharmaceutical production EB/OL]．(2006-10)．https://www．ivtnetwork．com/video/investigating-out-specification-oos-test-results-pharmaceutical-production．
[5] Medicines and Healthcare Products Regulatory Agency．Out of specification & out of trend investigations [EB/OL]．(2017-10-02)．http://nl．findeen．com/mhra_oos．html．
[6]贾春建,关蕾,杨月华等.试述实验室比对工作是评价检验技术水平的有效措施[J].中国医药指南,2013,07(26):295-296.
[7]赫明权.浅谈检验理化实验室的发展趋势[J].健康必读(中旬刊),2013,12(3):135-135.
[8]李军,宋金明.稳健统计和Grubbs检验法在实验室间能力验证结果分析中的应用-以海洋生物体中总汞测定结果为例[J].海洋科学,2014,16(2):29-33.
作者简介
刘岭（1981-），女，汉族，山东济南人，本科，药学事业部，质量负责人，执业药师
青岛科创质量检测有限公司：研究方向：实验室超标超常数据分析管理方法
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