课后回复 | 基于质谱技术的抗体药物结构表征及质量分析研究
课后回复
9月15日， 斯坦德生物药事业部技术总监刘国强老师为大家带来《基于质谱技术的抗体药物结构表征及质量分析研究》专场直播，分享了分子量、肽图、二硫键、翻译后修饰、糖型、电荷异构体、杂质残留等多角度介绍质谱技术在抗体药物质量分析中的研究和应用, 为全面表征抗体药物质量属性提供参考和借鉴等内容。
直播观看人数超2000人，反响热烈！评论区观众与老师互动积极，由于直播时长有限，未能解答到所有观众们的疑问。直播结束后，刘老师对直播间收集到的问题进行拓展和补充答疑。接下来，跟随小编一起课后复习回顾吧~
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导师介绍
刘国强
生物药事业部 技术总监
北京大学生药学专业硕士，香港中文大学分析化学专业博士。曾先后就职于安捷伦和赛默飞公司从事LC-MS应用工程师工作，具有10余年的方法开发和仪器分析工作经验。现任职于斯坦德生物药事业部，负责大分子实验室的能力建设和团队管理工作。
直播间答疑
Q1
DIA数据采集模式更推荐哪个型号的质谱仪器和相应的分析软件？
Waters QTof推荐MSE的DIA扫描模式，Sciex的Q-Tof主推 SWATH DIA的扫描模式，Thermo Fisher 基于Orbitrap的平台也有vDIA的采集模式，各家仪器公司都有相对应的分析软件方案进行数据处理，可根据需要进行选择。
Q2
课件PPT上写着“acidic:Asp isomerization intermediate succinimide”和“basic:succinimide intermediate from Asp ”这两种修饰有什么区别？
这张ppt上的信息来源于综述文章mAbs, 2019, 11(2), 239-264. 其中acidic: Asp isomerization intermediate succinimide参考了论文Anal Biochem. 2017, 520, 49-57. 而basic:succinimide intermediate from Asp 参考了论文Pharm Res. 2007, 24(6), 1145-56. 均为Asp脱水环化形成succinimide中间体的过程，论文中推测成酸峰的原因为蛋白构型的变化导致表面电荷的差异（It can be explained by the possibility that succinimide formation causes a significant conformational change, which leads to surface charge differences）。
Q3
在分子量水平如何区分序列突变还是某种修饰？
分子量水平无法绝对区分序列突变还是某种修饰，需在肽图层面进行进一步的表征确认分析。
Q4
O糖含量分析，现在用的是试剂盒方法吗？
O糖含量分析目前是采用的试剂盒方法。
Q5
蛋白质的质谱结果为什么呈正态分布？
蛋白质在质谱ESI离子源电离过程中会结合不同数量的H+带上正电荷。蛋白结构的差异及离子源的条件决定了蛋白带电荷的数量，其中带上某个数量的电荷状态是最稳定的，趋势最多。随着带电荷的增加或减少蛋白的稳定状态就会相应减弱，趋势也就相应减少。最终质谱图上体现出来的就是一个类似正态分布的状态。
Q6
糖基化蛋白为什么要切掉糖基再质谱分析？
并不是所有蛋白都需要切糖再进行质谱分析。切糖可以降低糖基化蛋白的异质性，对于糖基化复杂的样品如融合蛋白Etanercept可降低质谱图的复杂度，有助于顺利解卷积出分子量信息。
Q7
在做肽图水平的PTM检测的时候，用Trypsin和Glu-C分别酶切(两种酶得到覆盖率都很好)得到的N糖G1F相对含量的差别很大，而主要N糖G0F G1F 差别很小是什么原因造成？
用Trypsin和Glu-C酶切造成的糖型相对含量差异大，可能的原因是由于不同酶切造成的糖肽长短不一，引起质谱离子化时响应的差异。最终体现出相对含量的差异。
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基于质谱技术的抗体二硫键表征分析
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