液质联用检测兽药残留.pptx
12月23日下午三点，【仪器微课堂】第八期 液质联用检测畜产品中兽药残留如期举行。
首先要感谢端老师来给版友们做分享，端老师现任徐州市农产品质检中心副书记。熟悉LC-MS/MS、GC-MS/MS、GC、HPLC、AFS、AAS等大型检测仪器设备，熟悉食品农产品各类政策法规；仪器检测、微生物学检测等多种检测手段；计量认证，农产品检测机构考核等工作
分享专家：徐水市农水畜禽产品质量检测中心高级兽医师 端礼钦分享形式：采用PPT图片+语音形式
参与人数：306
内容整理：ghsunmer
嘉宾分享环节：
本次分享将从以下几方面进行：
β-受体激动剂的简介：
以上是本次介绍的主要目标物质的结构式。本次分享就是以上面几种物质为例，把几种β-受体激动剂的类型都包含了。
如果食用了含有β-受体激动剂的肉类，人们将会有不同程度的反应，比如：面色潮红、头痛、胸闷、心悸、心慌、四肢麻木等，如果是对于本身就患有一些疾病的人来说，其反应将更加剧烈，甚至危及生命。
β-受体激动剂在养殖上的作用就是抑制脂肪合成，加快生长速度、增加瘦肉含量，可以提高10%瘦肉含量，这也就是我们常说的“瘦肉精”、β-兴奋剂，我国一直禁止使用的。
对于β-受体激动剂中毒的时间，最早是1990年在西班牙有一个家庭食用牛肝后“瘦肉精”中毒，我国最早是在香港于1998年发生了中毒事件，在2001年时发生一次最严重的中毒事件，大约有1000多人中毒。我国于1997年开始部分限制β-受体激动剂的使用，后来逐渐加入许多药品，禁止于所有畜产品使用。
目前对于β-受体激动剂的主要检测方法可以归纳为以上几类。
胶体金方法在养殖场与屠宰场使用较多，也就是常说的试纸条法；Elisa法因为有一定的假阳性率，所以现在使用的越来越少了；HPLC法使用不多，因其检出限与检测效果的问题没有被广泛使用；目前使用较多的后是两种，气质法早期经常被用来定性，现在使用较多的还是液质联用法。
液质联用法的检测原理是先酶解，用高氯酸调节pH，沉淀蛋白，异丙醇与乙酸乙酯体系提取，经过阳离子交换柱净化，内标法定量。
以上是国标方法的前处理步骤，首先酶解、提取然后净化、检测。
提取时要不断离心、调节pH值。
采用固相萃取方法进行净化，因为β-受体激动剂一类弱碱性物质，所以采用阳离子交换柱。固相萃取一般步骤：活化，过柱、洗涤柱子，最后是洗脱。最后溶解，过滤，测试。此法的耗时长、步骤多、运用的器皿多，调节pH的步骤多。因为步骤过于繁琐，所以为了提高回收率，减少偶然误差，采用内标法而非外标法进行实验。
下面为大家分享中国兽医药品监察所开发的方法，据我们使用，感觉效果较理想。也是我们省中心在全省推广的方法。
将提取剂调整，乙酸钠溶液对很多β-受体激动剂的提取效果不佳，而乙腈极性强而异丙醇极性较弱，所以就可以将体系中不同极性的物质都提取出来。
β-受体激动剂在动物体内也会发生油酸化反应与葡萄糖醛酸络合反应，所以大部分β-受体激动剂是以结合态形式存在。样品中的β-受体激动剂则会以游离与结合两种形式存在，而结合态的极性较强。用乙腈与异丙醇则可以把两种形式的都提取出来。
此外如果想提高萃取效果，则可以适当增加异丙醇/乙腈溶液的量。
然后是离心与氮吹，温度提高了，耗时较长，大约需要一小时左右。
之后是酶解，温度也有所提高，时间就减少，大约需要两小时，与国标相比节约了大量时间。
可以适当提高转速。一些脂肪含量较高的样品可以在酶解后加入正己烷去酯。
最后溶解液的体积增加了，方便进样。
以上是我单位的液质联用设备图与三重四级杆质谱原理图。
以上是国标方法的仪器条件与离子参数表。
以上是改良后的仪器条件与离子参数。我们单位采用的是超高效液相色谱，所以仪器条件略有不同。采用氘代内标进行实验，仅供大家参考。
上面是几种物质与其内标的总离子流图。
这是克伦特罗与内标的响应值。
这是莱克多巴胺的线性指标，大于999.
线性范围回收率等如上。线性范围可以扩展，回收率良好。重复性RSD<10%。关于回收率，因为内标响应值的差异，而且前处理步骤复杂，所以如果用外标法的回收率较低。外标法的沙丁胺醇的回收率较高也就是到达20%，莱克多巴胺可以到达60-70%，所以说对于β-受体激动剂不是完全不能用外标法，对于个别组分也是可以的，但是如果是做多组分的，建议还是采用内标法。
注意内标要与目标物的峰面积相匹配，否则需要稀释。
对于一些新的方法则要看大家的实际需求，常规的实验还是需要酶解的。也有些文献说酶解对络合态的β-受体激动剂效果较好，对于游离态的可能会损失回收。所以方法的选择要针对需求，如果是初筛，或者针对性较强的则可以考虑其存在形式来选择方法。对于方法选择推荐用阳性样品进行实验，因为加标回收的方法不能保证混合均匀与生物体反应，所以还是不能确定其效果如何。
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