近万字长文概述RNA常规样本采集事项 | 核酸提取专题

前两节内容，我们已经了解到了核酸惊心动魄的百年史与RNA背景知识全解，在对核酸有了一个基础的认知与了解之后，我们就一起来看看RNA常规样本采集事项。

01样品采集前注意事项

高危样本寄送声明

对于危害程度为第一、二类的高致病性样品，只接收提取后的核酸样品，不接收组织、血液、菌体等样品。对于危害程度为三、四类的致病性或传染性的样品（组织、血液、菌体等），必须先确认无高致病和传染性且能进行后续实验后再安排样品寄送。危害程度的判定标准具体参见《人间传染的病原微生物名录》。

样品应采用 WHO 提出的三级包装系统，第一层容器：装样品，要求防渗漏；第二层要求耐受性好、防渗漏，容纳并保护第一层容器；第三层容器：放在一个运输用外层包装内。在第二层包装注明“致病性样品接收时请注意”字样，尽量同时附上病原菌拉丁文，并在信息单注明其危害程度及接收注意事项。

如果未提前告知样本中病原菌信息，联川有权销毁或返还样本。

样本准备应该遵循的基本原则

• 代表性原则：

取样的代表性关系到实验结果是否具有科学意义，因此您应该根据实验目的慎重选择合适的取样方案。病变组织样本中不应夹带正常组织，正常组织样本中不能含有病变组织。有条件时，应做到实验组与对照组的样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致，否则可能会影响实验结果的可信度。

• 准确性原则：

代表性样本的各种特征数据必须被准确记录，并按要求（低温、迅速）采集、处理、贮存、运输，最终正确地按实验设计进行实验和数据处理。

• 迅速性原则：

样本质量是影响实验结果的最关键因素，因此在采集、处理、贮存、运输过程中应尽可能地做到迅速，最大限度的缩短从样本采集到实验的时间。

• 低温原则：

所取样本离体后，应立即按要求处理后（如分割成小块）置于液氮速冻足够时间（至少1小时或更长），并保证在实验前始终处于-80℃以下，以避免RNA的降解。

由于样本采集方法不是唯一的，本指南提供为一般性方法。如您使用的方法已被证明有效或是您希望参照所研究领域的文献方法，您可以使用那些方法进行取样。

RNAsecure的使用方法

（Qiagen公司的产品说明书）

关于样本的包装和运输在第三章会有介绍，由于样本采集需要用到RNAlater，这里先对RNAlater做一个简单介绍。

• RNAlater的作用

① RNAlater是一种液态的，无毒的组织保存试剂。它能迅速稳定组织，保护非冷冻细胞RNA于原位。获得组织块后，切割成合适大小后，迅速浸泡在RNAlater中保存，这样可以不必马上处理样本，而且不用担心样本中RNA严重降解。RNAlater在室温下保质期为6个月，如放置在4℃条件下会引起沉淀，使用时需加热到37℃才可澄清。RNAlater可广泛应用于多种脊椎动物样本，包括脑、心、肾、脾、肝、睾丸、骨骼肌、脂肪、肺和胸腺等。RNAlater对大肠杆菌、果蝇、细胞和部分植物样本也有效。

②RNAlater可以配合各种常见的RNA抽提试剂盒使用，例如QIAGEN的RNeasy系列、LTI/GIBCO的TRIzol、Ambion的RNAwiz、RNAzol、TRI、RNA STAT-60以及利用Oligo（dT）原理的mRNA抽提试剂盒等。

• 如何使用RNAlater

RNAlater只能用于新鲜组织，在浸入RNAlater之前不能冷冻组织。RNAlater不会溶解或破坏组织样本的结构。如果需要的话，仍可将已经保存在RNAlater溶液中的组织取出分割成更小的组织块再重新放入到RNAlater中。

①动物组织：迅速的将样本分割成每边长均≤0.5cm，约豌豆大小的小块。组织块过大会影响RNAlater渗透入组织内部的效率，也会造成RNAlater无法完全覆盖组织，未被RNAlater覆盖的组织部位极易被核酸酶降解。小器官如鼠的、肾、脾可以不用分割，然后投入提前准备好的装有至少10倍体积RNAlater的1.5mL的冻存管中，使样本完全浸没在液体中，置于4℃中保存过夜（该步骤不可省略），干冰运输，或-80℃保存，注意纯脂肪组织不适宜使用RNAlater保存。

②植物组织：通常情况下，植物组织不建议RNAlater保存，因为植物组织含有细胞壁及次生壁，RNAlater不易渗透入组织内部，特别是表面有蜡质的植物组织，切勿用TriZol或者其他裂解液直接浸泡植物组织。如果实验室没有条件，如缺乏液氮、干冰以及-80℃冰箱等条件下，需要RNAlater及类似组织保存液保存的样本，严格按照操作说明进行，将样本分割成≤0.5cm的小块，具有自然屏障防止扩散的植物如蜡表皮的叶组织可能需要先破坏其屏障，以允许RNAlater进入组织，然后投入提前准备好的1.5mL的EP管中，加入RNAlater完全浸没样本，置于4℃中保存过夜（该步骤不可省略），干冰运输，或-80℃保存。

③培养细胞：离心沉淀细胞，用PBS洗二次，再用少量的PBS悬浮细胞，然后加10倍体积的RNAlater保存。

④白细胞：将白细胞从红细胞和血清中分离出来，并按组织培养细胞一样处理后，白细胞便能有效地保存在RNAlater中。不要将全血、血浆或血清保存在RNAlater中，因为这些样本中蛋白含量过高，与RNAlater混合后易形成沉淀。

⑤细菌：RNAlater具有抑菌作用，虽然细菌在RNAlater中不能生长，但细胞仍保持其完整性。

• RNAlater中样品的保存

①保存于-80℃：将样本在4℃条件下孵育过夜，然后从RNAlater溶液中取出样本保存于-80℃。对于组织培养细胞，不必去除RNAlater，只需简单冻存整个溶液。实验证明，细胞在-80℃条件下冻存于RNAlater溶液中并未出现溶解。样本可在室温下解冻及再冻存，其RNA的质和量都不会受到影响。

②保存于-20℃：将样本在4℃条件下孵育过夜，然后转移到-20℃。样本在-20℃条件下不会冻结，但在存贮缓冲液中会有结晶形成，但并不影响随后的RNA提取。样本可随后在室温下解冻及再冻存，其RNA的质和量都不会受到影响。

③保存于4℃ ：目前尚无证据证明样本于4℃保存1个月内会出现RNA降解。

④没有冰箱：将样本放在尽可能冷的环境中。如果周围温度超过25℃，应尽可能使RNAlater中的样本冰浴保存数小时。

• RNAlater 中样本提取RNA

①组织：用消毒镊子将组织从存贮溶液RNAlater中取出，浸泡在RNA提取溶液中。一旦将组织放入RNA提取溶液中，匀浆一定要迅速进行。

②细胞：从存贮在RNAlater中的细胞中提取RNA有两种操作方法可供选择，去除RNAlater或者从细胞与RNAlater的混合物中直接提取RNA。

• 从RNAlater中取出样品

①去除RNAlater：因为RNAlater的浓度比典型的细胞培养介质的浓度高，因此用正常沉淀活细胞的离心力无法沉淀RNAlater中的细胞。离心沉淀细胞，去除RNAlater。（HeLa细胞大约需要3,000g，但其他细胞可能不能容忍这个速度，或者他们需要更大的离心力。）

离心力：离心机有离心力（×g）和每分钟转速（rpm）两种模式，换算公式为g=有效离心半径（cm）×11.18×10-6×rpm2

②从RNAlater保存的细胞直接提取RNA，我们可以用一步法破碎/提取溶液（如TRI Reagent和 RNAwiz）从没有去除RNAlater的细胞中纯化RNA。可以向细胞混合物中加入10倍体积的一步提取溶液进行提取操作。

RNAsecure的使用方法

（Ambion 公司的产品说明书）

• RNAsecure简介

在分子生物学试剂中用Ambion公司的RNAsecure代替DEPC，有很多优点：

①可以加入到不能用DEPC处理的溶液中（如：Tris或MOPS缓冲液）；

②可以加入到不能被高压灭菌的溶液中；

③可以加入到加酶之前的酶促反应中。Ambion已经测试了有RNAsecure 试剂存在的如下酶促反应（先于酶加入）：RNA多聚酶T7、T3和SP6的体外转录（37℃），MMLV和AMV逆转录（42℃），以及SuperTaq PCR（94℃），均没有出现酶抑制现象。

• 使用方法

①用缓冲液或经过处理的溶液稀释RNAsecure试剂到1×，充分混匀。

②将mix放置于60℃水浴孵育20min，后冷却至室温。这样的溶液可备用于接下来的RNA提取和分析，或者保存于室温、4℃或-20℃以备将来使用。

③为了消除任何可能发生在经过初处理之后的RNA酶的污染，在使用前可以将RNAsecure溶液在60℃水浴锅中温浴10~20min。

• 注意事项

RNAsecure试剂只在高于45℃的条件下才有活性，但当反应体系孵育温度超过该温度时可能会使一些酶失活。因此，用RNAsecure处理反应缓冲液时要以加入酶之前做为临界点，然后进行酶促反应时孵育温度低于45℃。注意：这不适用于Taq多聚酶。

02植物组织采集

植物样品的分析结果是否有价值，首先取决于植物采样技术是否正确。植物采样技术包括各类植物样品不同部位的采集、制备和保存技术。根据来源可划分为天然的植物材料（如植物幼苗、根、茎、叶、花、果实等器官或组织）和人工培养、选育的植物材料（如杂交种、诱导突变种、植物组织培养突变型细胞、愈伤组织等）两大类；需要根据分析目的、分析项目、精度要求以及植物种类和生长条件选择合适的采集和制备方法。

植物采样原则

1）样株必须有充分的代表性；

由于土壤本身就是一个不均一体，其不均一性会造成其上植物生长状况的不均一。施肥、灌溉和种植等农事操作上的差异也会影响植物生长状况的均一性。因此，要使植物样品有充分的代表性，其采样须符合统计学原理，即按照“多点、随机”的方法采样。

2）采样时间和部位的统一性；

同一株植物不同生育期、不同部位及同一天的不同时间，植株体内各种物质有显著的差别。因此要有统一的采样时间和部位，这样分析结果才有可比性和应用价值。在同一时间、同一地点采集的同一种植物，剪成若干份都编同一号；同一时间不同地点或不同时间同一地点采集的同一植物，要编成不同号。

采集建议

1） 选取新鲜、幼嫩、生长旺盛的组织部位，植物组织越幼嫩越新鲜所含的次生代谢产物越少，随着植物的逐渐成熟，所含的次生代谢产物越来越多，而次生代谢产物会影响RNA的抽提。（主要还是有研究目的决定需要采集的部位及时期）

2）（部分样本可选做）迅速用预冷的RNase-Free水配制的1×PBS或生理盐水清洗组织表面的污渍，吸干表面的液体。用剪刀剪切成长宽≤0.5cm的小块（若非特殊情况，长度最好不要超过2cm）。

3）  提前将耐-192℃低温的RNase-Free螺纹冻存管写好编号并预冷，然后将处理好的组织迅速放入管中，液氮速冻>1小时，转移到-80℃长期保存,在RNA提取前避免反复冻

4）干冰寄送样本。若在离体后10min未用液氮速冻降温，极有可能引起样本降解。不可直接将样本放入-80℃保存，此时低活性的RNase仍能引起样本降解。

注意事项：

1）植物组织一般不建议RNAlater保存，因为植物组织含有细胞壁及次生壁，RNAlater不易渗透入组织内部，特别是表面有蜡质的植物组织；

2）勿用TriZol直接浸泡植物组织；

3）不允许将植物组织磨成粉寄送；

4）表面含有较多蜡质的植物样本或次生代谢产物含量极高的植物组织或植物组织的茎和根及种子RNA得率通常会较低，为提高RNA的得率需要加大送样量，为普通样本送样量的3-4倍；

03动物组织采集

1）取动物的新鲜组织，迅速用2℃-6℃预冷RNase-Free水配制的1×PBS或生理盐水清洗组织表面的血迹和污渍，使用无尘纸巾吸干表面的液体；

2）去除非研究的组织类型（如结缔组织，脂肪组织等），如果是临床病变组织的取材要正确判断病变以及正常组织，应将病变组织周围的正常组织去掉，反之亦然；

3）大体积样本需要分割成长、宽、高≤0.5cm（豌豆大小）的小块，再次用2℃-6℃预冷RNase-Free水配制的1×PBS或生理盐水清洗组织表面的血迹和污渍，使用无尘纸巾吸干表面的液体；

4）取切割好的组织块（每个样本10块左右）迅速放入预冷好的RNase-Free的带螺纹口的耐-192℃超低温冻存管中，迅速置于液氮速冻1-2h后转存于-80℃长期保存，在RNA提取前避免反复冻融。

注意事项：

1）如果实验室没有条件，如缺乏液氮、干冰以及-80℃冰箱等条件下，需要RNAlater及类似组织保存液保存的样本，严格按照操作说明进行，详细步骤见RNAlater简介里动物组织RNAlater使用方法；

2）不允许寄送用TriZol或者其他裂解液保存的组织样本，因为用TriZol保存的组织样本，无论是研磨好的粉末还是切割好的组织块，所抽提的RNA质量普遍很差；

3）动物及临床组织不要使用锡箔纸包裹，锡箔纸容易与动物及临床组织粘一起，RNA抽提的过程锡箔纸容易带入，引起污染，且锡箔纸上的字体容易模糊导致无法辨别；

04细胞样品采集
常规提取RNA类细胞样品

1）贴壁细胞的处理：

①从培养箱取出贴壁生长细胞，显微镜下观察细胞确定生长状态良好，小心去除培养基；

②加入与培养基等体积的无酶水配制的1×PBS，平放1min洗涤细胞，然后弃去PBS，重复一次；

③加入适量裂解液反复吹打至充分裂解（以TriZol为例，10-15cm的大皿，每次先添加1-2mL，吹打混匀，裂解充分的标准为吹打时液体不粘稠，流动性好。如果液体过于粘稠说明还未裂解充分，需添加裂解液，每次添加的量建议为100μL左右，持续添加直到液体不粘稠为止）；

④转移至耐-192℃低温的螺纹口冻存管后，-80℃冰箱长期保存，干冰运输。

2）悬浮细胞的处理：

①选取生长状态良好的细胞悬液；

②200-1,000g，离心5-10min，弃上清培养基得到细胞沉淀；

③加入3mL RNase-Free水配制的1×PBS后，宽口枪头轻柔吹打重悬细胞沉淀，然后用200g，离心5min，弃PBS，重复清洗一次；

④加入适量TriZol裂解液反复吹打至充分裂解（裂解标准同上面的贴壁细胞处理方式类似）；

⑤转移至耐-192℃低温的螺纹口冻存管后，-80℃长期保存，干冰运输。

表1.1 裂解液使用参考

注意事项：

1）勿将干冻的细胞直接寄送，因为细胞冻融过程中形成的冰晶很容易刺破细胞，造成细胞RNA会降解；

2）细胞样品勿用胰酶消化，胰酶会消化细胞膜上的膜蛋白，导致细胞破裂，破裂的细胞会释放核酸酶，增加RNA降解。

单细胞/微量细胞（RNA）转录组测序样本

图1 SMART建库原理

单细胞转录组测序建库方案采用SMART（Switching Mechanism at 5’End of RNA Template）技术，能以1-1,000个细胞或10 pg-10 ng总RNA为模板，通过第一链cDNA合成及扩增，获取足够的用于序列分析的样本，从而解决了诸如单细胞等微量样本因RNA含量过低导致的无法使用常规转录组进行建库测序的技术难题。第一链cDNA合成以Oligo dT Primer为逆转录引物，并利用 Reverse Transcriptase 的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接头序列，通过该接头序列进行后续的PCR扩增，从而获得高质量的全长cDNA扩增产物，有效避免了cDNA合成过程中的3’偏好性和rRNA的污染。SMART技术检测灵敏度高、体积兼容性广，适合低丰度基因及低浓度模板的检测，一般情况下，一个反应可以产生2-20 ng的cDNA扩增产物。

适宜细胞类型：适用于哺乳动物细胞以及其它无细胞壁的真核细胞。植物，真菌，细菌等有细胞壁结构以及经过任何形式固定的细胞，均不适用。

细胞数量要求：以 1-1,000个细胞为宜，过多的细胞会对反应有一定的抑制作用。单个反应推荐在200个细胞以下，整个体系不超过5μL。

注意：这里使用的裂解液为该项目特定试剂，需由联川生物直接寄送使用。

• 悬浮细胞：悬浮细胞一般推荐采用低速离心收集（800-1,000g，5min），得到的细胞沉淀以 PBS（RNase-Free）清洗 2 次后重悬。根据实验需要取适量样品，迅速转移至 200μL 洁净的 PCR（RNase-Free）管中，立刻进行实验或者按照 PBS:裂解液=5:1（单管总体积不超过12μL）加入联川生物提供的裂解液保存或者运输。（每份样本取三个重复）

• 组织：组织经酶（胰蛋白酶、胶原酶）消化，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，低速离心收集细胞（800-1,000g，5min），得到的细胞沉淀以PBS（RNase-Free）清洗 2 次后重悬。根据实验需要取适量样品，迅速转移至200μL洁净的PCR（RNase-Free）管中，立刻进行实验或者按照 PBS:裂解液=5:1（单管总体积不超过12μL）加入联川生物提供的裂解液保存或者运输。（每份样本取三个重复）

• 贴壁细胞：去除培养基后以 PBS（RNase-Free）清洗 2 次，胰蛋白酶消化解离为悬浮细胞，低速离心收集细胞（800-1,000g，5min），得到的细胞沉淀以 PBS（RNase-Free）清洗 2 次后重悬。根据实验需要取适量样品，迅速转移至 200μL 洁净的PCR（RNase-Free）管中，立刻进行实验或者按照 PBS:裂解液=5:1（单管总体积不超过12μL）加入联川生物提供的裂解液保存或者运输。（每份样本取三个重复）

• 流式细胞仪分离细胞：流式细胞仪分离的细胞，如为单个细胞则需重悬于 5μL 的 PBS（RNase-Free）溶液中，如细胞量比较大，则PBS体积可根据实验需要酌情适量增加（PBS 体积应介于1细胞/μL~200细胞/μL 之间）。迅速转移至200μL洁净的PCR（RNase-Free）管中，立刻进行实验或者按照 PBS:裂解液=5:1（单管总体积不超过12μL）加入联川生物提供的裂解液保存。（每份样本取三个重复）

• 不同来源样本处理方法

①   哺乳动物细胞和其他无细胞壁结构的真核细胞可直接加入裂解液后冻存寄送。

②   胰脏、肾脏、血液等富含内源性RNA酶样本在分离到细胞后，按照 PBS:裂解液=5:1加入联川生物提供的裂解液，再加入终浓度1%的β-巯基乙醇进行保存及运输，以便提高该类样本预扩增成功率。例如体系为10μL，包括6μL（裂解液+样本），3μL H2O（Nuclease-Free），1μL 10% β-巯基乙醇。（以该种方式处理过的样本必须在备注上加以说明，以便我们采取相应的处理措施）

注意：加入裂解液的细胞在一星期内必须进行下步实验。也可将分离得到的活细胞使用细胞冻存液冻存，在需要的时候复苏细胞，使用这种保存方案请在复苏后确认细胞是否存活。死亡的细胞会发生明显的 RNA 降解而导致反应失败。切勿直接冻存或者干冰直接运输细胞样品。

细胞活性测定方法

• 由于细胞的基因表达是瞬时变化的，细胞类型、细胞活性及细胞所处周期的不同都会显著影响最终的cDNA产出。请确认细胞的获取方式对细胞活性的影响，我们建议在每次收集完细胞样品后对细胞活性进行鉴定，死亡的细胞会发生明显的RNA降解并导致反应失败。鉴定合格后建议尽快寄到联川生物进行下游实验，不适当的保存条件会导致细胞中的RNA降解。具体方法如下：

① 轻缓吹匀细胞悬液后，吸取3μL细胞悬液加入到3μL台盼蓝染液（0.4%），吹打混匀后取6μL至血球计数板，用倒置显微镜观察细胞计数，活细胞不着色，死细胞呈蓝色。（细胞量不足时，可将细胞悬液稀释，例如取1μL细胞悬液+2μL PBS稀释，再加入3μL台盼蓝）；

② 细胞计数：如图1.9所示，分别记录计数血球计数板上4个角落大格（白色部分共64小格）的活/死细胞数至少两次，当两次数值误差大于20%时，需要计数第三次，最后取最相近两次计数的平均值；

③   计算细胞浓度：细胞浓度≈（4个角落大格的活细胞总数+死细胞数）×5（cells/ μL）；

④   细胞活率=活细胞总数/细胞总数；

⑤  细胞总量=细胞浓度*稀释倍数*细胞悬液体积（μL）。

图2 血球计数板

血球计数板

7） 其他注意事项

①细胞培养基：细胞培养基中的成分可能会抑制 cDNA 的合成，所以推荐尽可能去除培养基后以 PBS 重悬细胞后再进行裂解反应；

②样品体积：实验中 RNA 样品或者以 PBS 重悬的细胞样品进入反应体系的体积不超过5μL。因此单个细胞或者极微量的 RNA 样品体积不得超过 5μL，样品含有较大细胞量或 RNA量的情况下，样品体积可超过 5μL，但最终进入反应体系的样品体积为 5μL；

③污染：在细胞培养，实验，分离过程中一定等要严格避免其他细胞或微生物污染，流式细胞仪一定要严格执行无菌操作。任何器具、试剂、耗材均需要保证无菌无其他细胞或核酸污染；

④培养过程中镜检监控可能存在的污染: 细菌：为黑色细沙状，不同细菌有不同外形，培养液一般会浑浊变黄。真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物。支原体：200-300nm左右，常规光镜检验可能无法发现，培养液一般会浑浊；

⑤细胞分选过程，清洗仪器使用的消毒水，75%乙醇等，必须新鲜配制；

⑥后续需要进行 RNA 提取操作的细胞样品采用容积为 500μL-1.5mL 离心管或冻存 管收集。无论采用什么类型离心管或冻存管，使用前均需要在超净台上以紫外灯照射 20min 以上。；

⑦备份建议：推荐每个样本采集三个重复，避免后期重复采样。；

⑧样本提交单：请务必在样本提交单上写明样本的具体来源（组织部位）；

⑨细胞活性测定：为了保证您的实验成功，在细胞量足够的前提下，请务必测定细胞活性，并在样本提交单上写明细胞活率、细胞浓度和细胞总量。

特别提醒：如样品细胞量或 RNA 较少的情况下，样品准备过程中得到的无论是细胞或 RNA 样品，均建议直接放在 200μL PCR 管中，以避免后续实验中因为转管操作，造成样品细胞因挂壁丢失或 RNA样品损耗。

关于细胞支原体污染

支原体又称霉形体，直径在0.1-0.3μm，是目前发现的最小的最简单的原核生物，可以轻松地通过滤膜，混入培养系统中，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分支状等多种形态。通常依附在细胞膜表面，支原体没有刚性的细胞壁，因此普通的抗生素对它根本不起作用。

图3 支原体

细菌和真菌造成的污染相对比较容易检测、预防和去除，然而支原体造成的污染很难察觉，即使生长密度高达 107-109CFU/mL，也很难有污染迹象（浑浊、pH 变化等）。

支原体污染对细胞培养造成多方面的不良影响，导致细胞生长变慢，状态变差，不会马上使细胞致死，但会影响细胞内的各种参数，如改变细胞膜抗原性，改变细胞新陈代谢，干扰核酸的合成，改变 DNA 转染效率，导致染色体畸变等。已经成为影响细胞培养的一个严重问题，保守估计常规细胞培养中支原体污染率为15%-35%，严重干扰实验结果的可信度。因此，定期进行支原体检测和去除，确保无支原体存在细胞培养体系内才能获得准确有效的实验数据。

图4 支原体污染对细胞的影响

典型的支原体污染来源

• 细胞之间交叉污染；

• 工作环境或实验器材的污染；

• 实验者无菌操作不佳；

• 培养基或其他试剂污染；

• 制备细胞的原始组织或器官的污染。

常用支原体检测方法

图5 常用支原体检测方法

出现支原体污染的细胞样本，即使进入后续实验，也不能保证实验结果精准。因此建议老师在细胞培养过程，定期进行支原体污染的检测，并及时去除，避免由于支原体污染而造成的实验误差。Cord C. Uphoff等研究比较了MRA（ICN）、Plasmocin（InvivoGen）、BM-Cyclin（Roche）、MycoZap（Lonza）等支原体清除试剂的性能发现，Plasmocin和BM-Cyclin在清除效率、耐药性、毒性等方面会更有优势。下图文章给出的处理方案可供参考。（https://doi.org/10.1155/2012/267678）

图6 支原体清除参考方案

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关于RNA常规样本采集，在我们的核酸提取手册中还有10X单细胞样本采集、全血/PBMC/血清/血浆采集、全血/PBMC/血清/血浆采集、石蜡组织采集、非致病性菌样采集、微生物样本采集等各类样本采集事项。对其中内容感兴趣的老师可扫描下方二维码进行购买。

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